作者Altrose1993 (Altrose)
看板Biotech
標題[求救] MTT assay
時間Fri Apr 8 11:13:28 2016
小妹最近在做化療藥物對癌細胞影響的生長曲線
使用MTT assay
步驟如下：
1.先將細胞使用trypsin切下後去離心再懸浮1cc medium，之後去計數細胞
2.種在96well，每1well 1500顆細胞
3.會把算好的細胞數加到15cc 離心管的medium裡面去votex(因為之前都打散但不均勻所
以想到此方法)
4.等24小時後再去加8個不同濃度的藥物
5.等72小時加入MTT試劑，再等3小時加入DMSO之後去測吸光值。
所遇到的問題如下：
種細胞的時候都會看有沒有種均勻
每次都看有種均勻了 但加藥72小時後細胞都沒有受到藥物毒殺的影響!!!!(長得超好超滿
)
可是之前學長做曲線都有出來...
藥物濃度跟細胞數都跟學長先前的實驗一樣沒有改
所以很困惑到底是哪裡做錯了QAQ
還請大大們解惑，謝謝
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1F：→ roy047: 藥壞了 04/08 11:39
2F：→ Altrose1993: 回r大，藥應該沒有壞!! 因為另一個細胞株曲線有出來 04/08 11:50
3F：→ Altrose1993: ，抱歉忘記講了 04/08 11:50
4F：→ blence: 所以你跟學長用不同細胞？ 04/08 12:04
5F：→ Altrose1993: 細胞跟藥都是一樣的QQ 04/08 12:10
6F：→ untilnow: 藥的有效期限?有沒有反覆凍溶? 04/08 12:47
7F：推 leptoneta: 請學長repeat一次確認有效 04/08 13:18
8F：推 Smango: 請跟你學長好好討論實驗細節 04/08 13:38
9F：→ htLiu: 藥濃度稀釋錯了? 04/08 16:23
10F：推 greenmoon00: 藥怎麼加的？建議跟medium先配好再加 04/09 07:44
11F：→ greenmoon00: 有些人會直接把藥加進去，很容易誤差 04/09 07:44
12F：推 jieyuwang: 細胞太少看不出誤差？ 04/09 14:32
13F：→ Altrose1993: 回g大，藥是跟medium混合的 04/13 08:15
14F：→ Altrose1993: 回h大，已經有重算，藥稀釋倍率沒有問題.... 04/13 08:16
15F：→ Altrose1993: 感謝大家的回覆QQ已經有好好跟學長討論了 最近會重 04/13 08:17
16F：→ Altrose1993: 做 04/13 08:17
17F：推 roc0860: 我的細胞數是3000/1well,然後MTT作用4hr，給你參考 04/14 23:29
18F：推 lackgirl: 能附上吸光值數值嗎? 04/14 23:52
19F：→ chvkimo: 實驗條件都一樣 那麼操作方法有一樣? 04/17 02:03
20F：→ chvkimo: 就像你將cell打散的方法 04/17 02:04
21F：→ Dreamwakeup: 1.查藥有沒有 light sensitive 04/27 16:20
22F：→ Dreamwakeup: 如果有...可能藥壞掉了... 04/27 16:30
23F：→ Dreamwakeup: 2.我是用 1ml pipetman打散較"團結"的細胞塊 vertex 04/27 16:32
24F：→ Dreamwakeup: 太強怕 傷細胞 04/27 16:32
25F：→ Dreamwakeup: 3.呃..我種6000or 8000/cell ,48H. XD 04/27 16:34
26F：→ Dreamwakeup: 4.然後請學長用你用過的細胞 同批藥 "同樣"步驟重複 04/27 16:44
27F：→ Dreamwakeup: 實驗 如果...還是不一樣 ..呃...就無解惹.. 04/27 16:44
28F：→ Dreamwakeup: 不過我移除 treated drug的medium後 MTT只處理20~40 04/27 16:49
29F：→ Dreamwakeup: min 就是了吸光0.6~0.8偶爾破個1這樣 XD 04/27 16:49
30F：推 a910298: 會不會是細胞計數算錯,加太多細胞了?? 05/31 10:18