作者l19911012 (全省吃透透)
看板Biotech
標題[求救] ELISA做不出來～煩請各位大大指點
時間Wed Mar 16 16:09:04 2016
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
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我的實驗是從空盤開始coating
從過年前試到現在都做不出來
有思考過是不是因為沒有binding上去的問題
從原本的夾心法換成直接先種抗原
還是做不出來
我的抗原是IgG
Buffer也是carbonate 和PBS都試過
不知道是不是我在wash時有問題
我通常垂直向下倒
然後well裏沒有液體
不知道這樣有沒有問題
請各位大大救救我～
手機排版請原諒～
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1F：→ lesswind: 還是你coating的時候就出問題了呢? 03/16 16:28
2F：→ YAHO0: 做不出來有很多種做不出來 把情況描述清楚 03/16 21:40
3F：→ jsi: commercial kit還是自己開發的套組? 用錯盤子? coating buf. 03/16 22:55
4F：→ jsi: 用甚麼buffer? 03/16 22:55
5F：→ Fongshin: 寫的有點簡略，可以在寫清楚一點嗎 03/16 23:23
6F：推 leoblack: 是repeat不出來？還是Ab根本不認native蛋白？ 03/17 09:32
7F：→ l19911012: coating buffer 就是試過PBS和carbonate 03/17 23:09
8F：→ l19911012: 盤子是用PS材質的去coating 因為我是要 03/17 23:09
9F：→ l19911012: 用我自己的系統去做顯色來測抗原 所以跟 03/17 23:09
10F：→ l19911012: 一般二抗後面的步驟不太一樣 有試過藥品 03/17 23:09
11F：→ l19911012: 應該沒有問題 我的抗體跟抗原也是同源 所 03/17 23:09
12F：→ l19911012: 以不知道問題出在哪 03/17 23:09
13F：推 psamei8098: 可能是藥品壞掉 03/19 00:55
14F：推 ararthur: 很有可能是藥品壞掉+1 特別是protein 我之前就是用了放 04/03 03:04
15F：→ ararthur: 超過三個月的recombinant protein 整個結合力出了大問題 04/03 03:04
16F：→ ararthur: 不過你還是應該詳述一下所謂的"做不出來" 是哪裡做不出 04/03 03:04
17F：→ ararthur: 來、結果呈現什麼情形？ 04/03 03:05
18F：→ ararthur: 如果是curve完全無法拉得出來 建議要先做詳細的titrate 04/03 03:05
19F：→ ararthur: 才能確定每一個chemical是在適當的濃度下 否則飽和或未 04/03 03:06
20F：→ ararthur: 到敏感度限制的時候 是完全無法看出curve變化的 04/03 03:06