作者Astrophyllit (Astrophyllit)
看板Biotech
標題[求救] 含甘油保存劑之生物樣品的蛋白質萃取方法？
時間Thu Mar 10 00:38:34 2016
哥哥沒有帳號所以代p.o
可能會回覆比較慢
如題
我的樣品應含有甘油保存劑
想要萃取其蛋白質
而後進行蛋白質二維膠體電泳、尋找未知的功能性蛋白質
因樣品含甘油，不太好前處理
跪求適合的方法或protocol
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.47.9.234
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1F：→ tynse71864: 標題怪怪的 ? 03/10 00:52
2F：→ Astrophyllit: 跪求～含甘油保存劑之生物樣品的蛋白質萃取方法？03/10 01:04
3F：→ Astrophyllit: 感謝告知 其實我也第一次發文 沒注意到標題字數03/10 01:06
※ 編輯: Astrophyllit (114.47.9.234), 03/10/2016 01:07:35
4F：推 wanderchang: 透析03/10 19:40
5F：→ Ianthegood: 所以sample是什麼? suspension culture? trizol?03/10 23:29
6F：→ Ianthegood: phenol? cell pellet?03/10 23:30
7F：推 Sherry5566: 透析+1，看是用透析管還是透析膜，端看你蛋白的耐受03/11 16:18
8F：→ Sherry5566: 度03/11 16:18
wanderchang: 透析
我回答：我的樣品未知其蛋白質資訊，只知道是廠商堅稱含有酵素成分的污泥沉降劑(用於處理廢水)，透析膜孔徑大小的選擇可能是一件難事！？
→ Ianthegood: 所以sample是什麼? suspension culture? trizol?
哈哈！我的樣品不是動物組織、植物、細胞、沒有 suspension culture 和 pellet 可言耶！但是超高速離心後倒是可以把那褐色的沉降物當成pellet，去掉上清液。
另請問trizol是萃取RNA的試劑？？
→ Ianthegood: phenol? cell pellet?
我回答：有人好像有建議過含油類的樣品可以用Phenol法萃取，但一開始不知道如何前處理，超高速離心，假裝它有pellet？嗚嗚
※ 編輯: Astrophyllit (49.215.19.158), 03/11/2016 16:35:27
9F：推 leoblack: 跑個FPLC,用Desalting column置換成沒有甘油的buf 03/11 17:00
10F：推 star55555: 怎樣萃取蛋白？ 03/11 18:44
11F：推 wanderchang: 3k大約30個胺基酸，你的東西聽起來是個酵素，不至於 03/11 21:35
12F：→ wanderchang: 比這還小？ 03/11 21:35
13F：→ wanderchang: 透析完再做活性測試 03/11 21:37
14F：→ Ice9: 蛋白過透析，還要考慮緩衝液和pH值。就怕凝集或降解。 03/13 03:19
15F：→ Sherry5566: 你的酵素很耐嗎？ 用desalting column是快速的透析 03/14 10:49
16F：→ Sherry5566: 有可能變性喔！ 03/14 10:49