※ 引述《Tsuyokunaru (小強)》之銘言： : 大家好　因為我不是生科相關科系的　但是因為實驗會牽涉到PCR : 所以有些問題想請教...... : 我們一直都是用HBV當TEMPLATE (然後用自行設計的機構跑PCR) : 只是最近想複製長片段 出現一些問題 : 跑膠後結果是亮在低於100bp的位置@@ (primer是大於400的) 這primer好長…還是是指產物長度？ 這麼長的primer會不會有二次結構問題？ 而且primer這麼長，primer dimer應該也很長吧 所以我大膽猜是產物長度？ 至於100bps那個，我覺得是primer dimer : 不管是我們的機台還是傳統機台 所以推測是我們DNA來源沒有那麼長? : 那是PRIMER DIMER嗎? 還有其他可能性嗎? : 然後請教相關科系學姊 她說可以用plasmid當template : 濃度是 0.1mg/ul : 這邊我有點不懂...... 你學姊講得也不夠精確， 她只給你濃度，沒告訴你要放多少量… 這個 總之，用plasmid做模板不需要放太多量 我自己喜歡從「plasmid 總量10ng」開始進行PCR （plasmid濃度太高就要稀釋） : 因為我們之前都是用例如 10^8 copies/ul 來標記濃度 : 那這樣我要怎麼轉換?? : 我查了一下 鹼基對平均分子量660/mole : 我看到有外國類似知識+的論壇有這個回答 : https://goo.gl/K5VpxV : 可是 660 x 6 billion = 3.96 pico gram (pg) ??? u : 不懂這是什麼意思？ : 所以還是想請問有人能淺顯易懂的解說一下嗎QQ 1. 那個討論串有另一個人提出看法啊， 不過他們在算的是基因體的量 而且也有人說他PCR會放多少「總量」的plasmid做為模板… 2.你可以用“nucleotide 分子量”去搜尋 應該可以找到較明確的換算法 （前提是你要知道你的plasmid有多少base pair） : 然後更換成這個TEMPLATE後 : 我們的機台還是跑在低於100bp... 傳統就的確在正確位置了 : 這樣是anealing extension 時間不夠?? 還是溫度不夠? 溫度太高? : 因為短primer是ok的...... 有可能是機臺溫度不夠精準嗎？ （純猜測，機器相關的問題我不懂@@…） : 然後還有一個蠢問題 : 查了一下plasmid 這好像是細菌或酵母菌之類才有的 : 可是HBV 不是病毒嗎@@？ 天然狀況下，plasmid的確主要存在於細菌中 但在現在已經變成一個十分普遍的研究工具 你用的plamid是人工製造的產物， 至少包含你PCR 的目標基因 : 因為不是學生物的　　真的不是很懂這塊　　但是還是想要了解基本的 : 麻煩板友多多指教一下！！ 我會的大概就是這些， 希望有幫到你， 若有錯誤的也歡迎板友指正:-) ----- Sent from JPTT on my Sony D6653. --

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