作者michaelhsien (MichaelHsien)
看板Biotech
標題[討論] competent cell (勝任細胞)
時間Sun Dec 20 18:43:52 2015
最近實驗室在做中研院的CRISPR實驗
中研院建議使用 Invtirogen 的 E.coli
Stbl3 strain
來放大他們所提供的 lentiviral vector (plasmid)
因為這類的plasmid在
DH5alpha中
會有產量低、甚至發生重組(變異)的問題
但是這一株competent cell，一個反應要價
$700元左右
波仕特代理的Endura
G10 strain，也要
$400元左右
(相較於DH5alpha，一管大概$50元...感覺差很多)
最近實驗室可能會大量使用CRISPR
為了節省老闆的錢...
想起以前大學的時候，會自己做勝任細胞
雖然轉型效率不比市售的好
但是想想
頂多把plasmid加多點，或塗多點菌也是可以吧??
↑是這樣嗎? XD
我要transform的東西
不是ligation products
而是一般construct好的plasmids
所以
轉型效率對我而言可能不是很重要
(這些勝任細胞的genotype/phenogype才是我要的吧...)
還是之後的問題沒有我想像中的單純? XD
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1F：推 tynse71864: 建議詢問對方吧 不用 dh5a 應該有特殊理由 12/20 18:56
2F：推 shelix: lenti-vector用DH5alpha會發現很多重組的clones,光挑到 12/20 19:11
3F：→ shelix: 正確的就飽了 12/20 19:12
4F：推 silverberry: 建議一定要用 stbl3 系的菌種來做。不過自己做 12/20 22:38
5F：→ silverberry: competent cell 是沒問題的。ligation product 12/20 22:39
6F：→ silverberry: 多轉一點就是了。 12/20 22:39
7F：→ storm780121: 有做過這隻的勝任細胞 用起來ok der 12/20 23:43
8F：→ a90648: 我個人是用dh5a完全長不出來 12/21 14:58
9F：→ untilnow: 為什麼要省老闆的錢 浪費自已的時間？ 12/21 20:13
10F：推 qiet: Sigma好像有一隻沒那麼貴的可以用. 12/21 20:49
11F：→ qiet: DH5alpha以前用過, 要人品夠好就做得出來XDD 12/21 20:50
12F：→ blence: 可以拿到菌之後,找台廠代製生產 12/21 23:27
13F：→ blence: 台灣有幾個廠牌在做quick transform,其中有會幫人代工 12/21 23:29
14F：推 leoblack: 用建議的菌會快很多~用DH5alpha也可以做~只是要挑clone 12/22 10:49
15F：→ leoblack: 且一路都要送sequence再三確認序列有無突變 12/22 10:49
16F：推 michealking: 1.不用幫老闆省錢，做出對的才是重點 12/24 16:30
17F：→ michealking: 2.DH5alpha要用也可以啦 可是你要多浪費時間跑膠 PCR 12/24 16:32
18F：→ michealking: 時間上一點也不划算啊~~~ 12/24 16:32
19F：推 alaric: 別浪費時間了, 把錢花下去就是了. 12/24 21:20
20F：推 linporu: 花錢買時間實際很多 12/25 01:50
21F：推 mandible: 用lentivirus vector backbone 最好建議一定要用stbl2/3 12/26 13:57
22F：→ mandible: 的原因不光光是efficiency 的問題，也要造成transforma 12/26 13:57
23F：→ mandible: tion mutations！建議還是不要亂換competent cell 12/26 13:57
24F：推 Realthugz: 可以自己放大 到不要白痴到換strain 01/06 12:47
25F：推 Realthugz: lenti或是rosa26都要用這株 01/06 12:48
26F：→ Realthugz: 有同事沒注意用dh5a卡了很久才問我 01/06 12:49
27F：推 hitmd: NEB也有不錯的 可以參考看看 01/08 12:34