作者seethegame (影子)
看板Biotech
標題[求救] Mammalian two hybrid system
時間Sun Nov 29 01:18:17 2015
最近在做Mammalian two hybrid assay
使用的vector分別為: pM-X pvp16-y以及pg5seap
細胞株:NIH3T3
transfection reagent:lipofectamine 3000
方法是:
1.將NIH3T3放在1ml opti-mem in 6 well
2.將pM-x:pvp16-y:pg5seap =3:3:1的比例已lipofectamine 3000送進細胞
DNA總量為:5ug
3.第2天換成1ml growth medium(含FBS)
4.將medium取出並加熱65度 30分鐘 然後以冷光偵測
因為是預測試 所以組別只有1.pM-X pvp16-y pg5seap 和2.pg5seap only
原本想說就算兩個蛋白沒有交互作用seap含量也應該是1=2
可是測出的結果卻是2>>1
所以想請教各位前輩這大概是怎樣的情形 謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 122.117.10.237
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1F：→ blence: 猜2.的plasmid沒有在實驗操作上成為1.的合理對照 11/29 01:25
理論上pg5seap在沒有pM和pvp16的情況下是沒辦法表現seap
可是出現這樣的結果會讓人很困惑
※ 編輯: seethegame (122.117.10.237), 11/29/2015 01:32:27
2F：→ blence: 只有表現很低到背景值，不可能完全沒有表現 11/29 01:37
3F：→ blence: 別的不說,只送pg5seap送0.1ug或1ug,結果也會有差 11/29 01:39
4F：→ blence: 第一句推文在說,兩組seap在transfect過程沒控制到一樣的量 11/29 01:42