作者smallmin (小明)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE sample太黏稠 很難沉到well底部
時間Mon Nov 23 22:41:11 2015
我今天在跑SDS-PAGE
sample是E. coli expression total protein
就是取1 ml菌液 5000 g 離心1分鐘
去上清液 加入80 ul 2X sample buffer
100C 煮5分鐘 煮完spin down
冷卻後直接load到well 不分可不可溶
每個well load 10 ul
我有一部份sample可能因為菌量太濃
sample非常濃稠 tip會被堵住 很難吸取
我用12,000 rpm 離心 1分鐘
還是沒有pellet沉澱
直接load到well 因為太黏稠 sample裡面有氣泡
氣泡被包在sample裡 很難除掉
導致sample會從well裡浮上來 沉不下去
請問各位遇到這種狀況怎麼處理?
如果我換4X或5X sample buffer會比較好嗎?
謝謝
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1F：推 miki3327: +Urea 11/24 00:25
2F：推 jabari: sonication 11/24 01:12
3F：→ blence: 如下篇所說,用100~200ul加buffer去煮就好,多取無益 11/24 01:29
4F：→ blence: (是取100～200ul的菌液離心後的pellet) 11/24 01:31
5F：推 fentanyl945: Sonication 11/24 05:16
6F：推 michealking: sample buffer哪家的? 11/24 13:06
7F：→ michealking: 如果太濃稠可以不用取這麼多或是先超音波震一下 11/24 13:06
8F：→ michealking: 先試試看少量的先定量抓濃度 11/24 13:07
9F：推 dennisyoung7: 煮十分鐘就解套了, 敲簡單~ 11/24 21:47
10F：→ smallmin: 感謝大家提供的意見 11/24 22:22