作者GanLinBa (Fait votre père)
看板Biotech
標題[求救] clone
時間Fri Oct 30 04:12:20 2015
我想把我的gene接到pflag-cmv-2
Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TCA TCG ATA...........
-------------------------------------------
MCS
如果用EcoR1(G^AATTC) 去切把我基因接近去
Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TC-gene
請問這樣可以嗎 gene自己有start coden 所以會轉入
如果今天flag是在尾端 gene的前端可以隨意選 而尾端必須不能shift否則無法表現flag
可是今天flag在前端 但TC後面如果接上start coden的第一個A
會shift start coden (inframe/frame的問題)
1.假設我這樣接 flag會表現 那gene呢? 是不是就不會表現?
2.還是他自己有start coden 所以promoter開始做 protein 還是會translation
感謝
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1F：→ blence: 你已經知道1跟2的答案了,既然Flag跟gene的表現不會在同一 10/30 09:39
2F：→ blence: 個polypeptide上,這樣做不就是接心酸的 10/30 09:41
3F：→ GanLinBa: 感謝1f 所以flag 和 我的protein 都會有 10/30 10:47
4F：→ GanLinBa: 但用flag antibody 可能就壓不到我protein位子 10/30 10:48
5F：→ GanLinBa: 也就是IP即使抓得到flag但沒我的protein在上面？ 10/30 10:49
6F：→ blence: 你在繞口令,把整個seq進去translation,就知道產物是什麼了 10/30 11:29
7F：→ Ice9: 你幹嘛糾結在這種問題上？會 frame-shift 就應該要重接啊。 10/30 15:58
8F：→ Ice9: 1.那東西就不會是你想像的原來那個，雖然 flag-??? 會存在。 10/30 16:00
9F：→ Ice9: 但能不能撐到被你發現又是另一個問題了，但絕不是你要擔心的 10/30 16:01
10F：→ Ice9: 2.in vitro狀況下有可能會選擇其他ATG而被偵測到，但細胞內 10/30 16:04
11F：→ Ice9: 的表現，你想看到選擇其他 start codon 的產物，並不容易。 10/30 16:05