作者yoyokid (Anthony Joshua)
看板Biotech
標題[求救] PCR蒸發
時間Thu Oct 15 11:24:59 2015
是的本魯悲慘的研究生 研究的題目是做出一台PCR機器
跑完溫度循環 在監測SYBR Green的螢光 但目前卡在
檢體滴入我設計的卡匣 放到機器加熱後 檢體整個蒸發乾
也試過加入礦物油(mineral oil) 檢體20ul+10ul的礦物油
但依然還是蒸發殆盡 我查過文獻 礦物油、甘油、石蠟油
都有人使用來防止蒸發 這三種有什麼差異性嗎?
有沒有人可以提供一些建議 救救我這碩2.5的可憐延畢生
感謝萬分!!!
附上我的卡匣設計 :
http://imgur.com/71E2IKm
以壓克力當基材 用雷射切割出圓孔 再使用雙面膠將
鋁箔紙黏住當成底部 檢體注入後 再透過雙面膠將
透明投影片黏住 使他整個密封
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.116.78.236
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1F：推 tsubasawolfy: 1. 上蓋有無加熱 2.密封氣密性如 10/15 11:43
1.上蓋無加熱 2.氣密性應該是還可以 因為我卡匣滴入檢體密封後
放了兩個禮拜以上 裡面的檢體都還在
2F：→ blence: 礦物油是舊式機型會用到的,石蠟油我不知道 10/15 11:48
3F：→ blence: 甘油在你檢體就內含,加入與水互容稀釋體積,更抑制酵素活性 10/15 11:50
※ 編輯: yoyokid (140.116.78.236), 10/15/2015 15:45:35
4F：→ patricksky: 材料加熱過後 膨脹溢出? 10/15 20:51
5F：→ patricksky: 先把有顏色液體裝入卡夾 丟到95度C熱水環境做檢測吧 10/15 20:52
6F：→ patricksky: 檢查是否會液體溢出 10/15 20:52
7F：推 huangsw: 熱漲冷縮的因素考慮進去沒？ 感覺你上下的強度不夠... 10/15 22:12
8F：→ amou0303: 基本上做qPCR的管子蓋子密合度要非常高，我認為是密合 10/15 23:47
9F：→ amou0303: 度不夠才蒸發的。 10/15 23:47
10F：→ Ice9: 你的雙面膠加碰到油之後加熱到接近100度C時會怎樣？ 10/16 00:44
11F：→ Ice9: 你的氣密性設定有放著加熱兩星期嗎？ 10/16 00:45
12F：→ Ice9: 還有反覆地昇降溫對於雙面膠的黏性有没有什麼影響？ 10/16 00:45
13F：→ Ice9: 個人覺得P大的建議很好用，有做過類似的檢測嗎？ 10/16 00:50
14F：→ Ice9: 你的設計似乎是不用微量管的。那污染問題要怎麼解決？ 10/16 00:51
15F：→ Ice9: 還是我誤會了？如果是我誤會，我會覺得微量管有問題。 10/16 00:53
16F：→ Ice9: 另外有没有可能會是加熱太快，讓樣本衝出封鎖？XDD 10/16 00:56
雙面膠可耐熱到135度 我設計非微量管 是半徑2mm的圓
我覺得是我壓克力熱變形後使得密合度 變差甚至有縫隙
17F：推 cain07: 密合度不夠~~上周有做狀況跟你一樣~~換上膜之後就解決了~ 10/19 02:27
請問可以分享一下你用什麼上膜嗎? 或是詳細分享你的專案做個討論
※ 編輯: yoyokid (140.116.78.236), 10/20/2015 13:10:19
18F：→ Ice9: 那雙面膠在碰到油的狀態下，加熱時會穩定嗎？ 10/20 20:31
我有試過P大的方法 卡匣裡滴20ul墨水+10ul礦物油然後密封 分別丟在常溫水裡
與100度的水裡 都沒有溢出的現象 我覺得問題出在我加熱只有單面 導致有溫差
使得卡匣熱膨脹彎曲 破壞了我原本的密閉性
※ 編輯: yoyokid (140.116.78.236), 10/21/2015 15:00:44