作者grassshan (紙飛機啊歐歐踢欸死)
看板Biotech
標題[求救] Stripping 時間?
時間Wed Sep 30 13:24:24 2015
最近在做Western 想試試同張膜重Hy抗體
我們家Stripping Buffer是自己泡的~
pH是6.7
膜是PVDF膜
昨天剛照完冷光,想要洗一下重新Hy Actin
但翻遍實驗室的protocol...只有找到怎麼泡阿 QAQ!!!!
上網查跟問同學 好像 要加熱? 還有看到廠商賣的只要stripping 五分鐘?
想請問版上大大~
通常自己泡的Stripping buffer,會怎麼使用呢?
加熱的意思是 整罐裡面丟stir 放加熱器上加熱 再淋在膜上嗎 囧?
我查Stripping時間大概都在30分鐘內,
那結束後是從blocking開始,還是直接就可以Hy一抗了呢?
有需要我後續再補上完整配方~!!
感謝各位大大 >_<
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※ 編輯: grassshan (140.135.61.97), 09/30/2015 13:25:50
1F：推 blueness1225: 我們家是整罐裡面丟stir 放加熱器上攪拌均勻再淋在 09/30 14:21
2F：→ blueness1225: 膜上。 09/30 14:21
3F：→ blueness1225: Stripping放在60度水浴槽30分鐘,結束後是從blocking 09/30 14:21
4F：→ blueness1225: 開始,再Hy一抗 09/30 14:21
5F：推 tynse71864: 時間要依前一隻強度調整哦！ 09/30 16:38
6F：→ tynse71864: 我家是50度7分鐘 strip完在用tbst洗5分鐘3次 之後blo 09/30 16:40
7F：→ tynse71864: ck 09/30 16:40
8F：→ tynse71864: wash 3次很重要！！不然第二隻抗體會爆炸 09/30 16:40
9F：推 pandagod: 記得之前看過一篇文章是說stripping不如重跑一張XD 10/06 12:30
10F：→ pandagod: 如果只是test antibody倒是還好，定量就... 10/06 12:30
11F：推 Fongshin: 有用過跟廠商買的，用室溫三分鐘即可，還被我們拿來reus 11/03 19:17
12F：→ Fongshin: e，效果還不錯 11/03 19:17