作者REIDO (NEET)
看板Biotech
標題[求救] western會有黑暗星雲出現
時間Tue Sep 22 20:03:27 2015
http://tinyurl.com/ort2zx5
http://tinyurl.com/nrpayvk
這是我泡western常會看到的現象，某區域會完全沒訊號，背景和target都是。
我一抗是用夾鏈袋，blocking,二抗和ECL是加在塑膠盒中，有確定在shaker上
可以自由移動
從時間點上來分類有幾種可能
1.membrane在轉印前就有問題了，無法protein binding
2.blocking和1抗沒結合
3.2抗沒結合
4.ECL沒泡到
第一項，機率很低吧？
第二項，我覺得這種因素頂多沒有target，不會到連背景都消失
第三項....機率也不高，因為塑膠盒中的membrane可移動，應該都有泡到
第四項，我先把membrane丟到ECL盒子中，拿出來貼在盤子上，上面又繼續淋ECL蓋到滿
，機率應該也不高
總之目前我想不通，想請問有人知道這原因是什麼嗎？
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小黃小黃別生氣，明天帶妳去看戲。
我坐椅子妳坐地，我吃雞腿妳啃骨。
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1F：推 caesar0926: 1.請問用什麼blocking 2.WASH 次數 3.一二抗各泡在哪 09/22 21:00
2F：推 mesenchymal: transfer完用Ponceau S染membrane確認第一項 09/22 23:54
3F：→ mesenchymal: 搞不好就是氣泡或其它問題導致transfer不完全 09/22 23:55
4F：推 ljii: 1.transfer 沒密合或是膜和膠之間有東西 2. 手指摸到膜 09/23 10:05
5F：推 david31408: membrane存放多久了??? 你有用鑷子嗎? 09/26 22:57
6F：→ blackphantom: 看起來像transfer時有氣泡，不像blocking失敗 09/29 20:57
7F：推 LIAR: 不過transfer失敗的話，應該還是會有背景值吧?lane和lane之 10/12 00:05
8F：→ LIAR: 間的亮度，那邊也太黑了吧？ 10/12 00:06