作者allthebest (allthebest)
看板Biotech
標題[求救] ELISA sample加HCl 和NaOH
時間Tue Sep 1 17:29:11 2015
R&D的elisa kit 是要自己先手動coating的kit
protocol裡面寫sample 要pretreat
在100ul sample+50 ul 1N HCl incubate10
min 再加45ul 1N NaOH
這個步驟是了為什麼？純粹矯正ph值嗎？
因為我sample裡面標的蛋白的濃度已經很低了 加了HCl跟NaOH會更加稀釋掉了
所以想知道加酸跟鹼是不是必須的步驟 還是可以直接用原始sample測呢？謝謝大家
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1F：推 utadalove: 我們也是R&D system,也是自己coating,但是沒這個步驟 09/01 18:34
2F：→ allthebest: 蛤 是喔 09/01 19:57
3F：→ allthebest: btw 是 R&D DuoSet 系列 09/01 19:58
4F：推 qiet: 要看你的目標蛋白, 可能是有和其他component有interaction 09/01 20:44
5F：→ qiet: 會影響到抗體辨認才用酸去破壞交互作用吧 09/01 20:45
6F：→ Ice9: 加1/2體積的1N強酸鹼下去，你不覺得這個很暴力嗎？ 09/02 07:00
7F：→ allthebest: 由於他protocol沒有多加解釋原因 所以我也挺煩惱 09/02 16:28
8F：→ allthebest: 也沒有說不同類型的檢體是否有不同操作手段 09/02 16:31
9F：→ allthebest: 決定寫信問原廠比較快~~ 09/02 16:37
10F：→ allthebest: 剛跟R&D 技術員livechat 他說如果原始測的出OD 09/02 16:59
11F：→ allthebest: Ok 的話，不一定要加酸跟鹼 09/02 17:00
12F：→ Ice9: 我看了DuoSet kit的描述，看到它是為了使TGF-beta1成為免疫 09/02 17:00
13F：→ allthebest: livechat還不錯不用等回信 只是對方打字好快..XD 09/02 17:01
14F：→ Ice9: 活化狀態，以使得抗體能辨認。所以，加酸加鹼下去，就是為了 09/02 17:02
15F：→ Ice9: 加酸破壞其三四級結構，曝露出epitope。然後加強鹼(有hepes) 09/02 17:03
16F：→ Ice9: 中和整個溶液，免得後來的抗原抗體後應没有效果。 09/02 17:05
17F：→ Ice9: 所以才會用暴力方式作用。 09/02 17:06