作者aaaazzzz (找英文家教)
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標題[討論] 請問trypsin可以拿到37度水浴槽warm嗎？
時間Fri Aug 28 23:19:07 2015
請問trypsin可以拿到37度水浴槽warm嗎？
我先前的作法(幾乎本實驗室所有人的作法)，
會事先從冰箱把trypsin先擺在常溫5-20分鐘，
先開始繼代步驟，
加了trypsin之後，
會放在incubator 1-5分鐘，
用顯微鏡看有無把細胞打下來。
有時候趕時間，
trypsin可能常溫擺個1-2分鐘，
就開始繼代，
但會發現這時候的細胞就不容易打下來。
所以我想既然加入trypsin之後還要擺進去37度的incubator，
那是否可整罐trypsin直接放到37度水浴槽warm一下，
可節省時間，
但想到酵素放到37度，
會不會失去活性。
在此請教各位先進前輩的意見，
謝謝！
PS:有先爬文，看到一篇2006年的寫說他們的實驗室都會把trypsin放到水浴槽
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1F：推 caesar0926: 我認為不要放置太久應該是可以，怕酵素自切。 08/28 23:28
2F：→ caesar0926: 雖然我的方法都是同你第一個方法，在warm medium的時 08/28 23:28
3F：→ caesar0926: trypsin放在室溫一起等。 08/28 23:30
4F：→ caesar0926: 怕的話就盡量分裝吧?? 08/28 23:32
5F：→ blence: 我很討厭有人放水浴漕,用久了愈來愈沒效,都冰箱出來直接用 08/29 07:06
6F：→ blence: 所以1X 0.05%對一般癌細胞2-5分鐘都可起來 08/29 07:09
7F：→ blence: 10cm用0.7cc,不過應該算trypsin不多加,細胞就直接放進37度 08/29 07:13
8F：推 leptoneta: 怕回溫太多次的話 分裝不就好了 08/29 11:26
9F：→ aaaazzzz: 我實驗室有兩種方法,一種10cm給2cc的trypsin之後，從第 08/29 14:12
10F：→ aaaazzzz: 一盤逐盤吸起來,再放到incubator。第二種10cm dish加入 08/29 14:13
11F：→ aaaazzzz: 1cc trypsin後，直接放入incubator,之後再直接medium中 08/29 14:14
12F：→ aaaazzzz: 和。謝謝c大與L大提供分裝的意見。 08/29 14:17
13F：→ aaaazzzz: 所以大家進culture room直接把少量的trypsin warm，然後 08/29 14:19
14F：→ aaaazzzz: 觀察細胞，觀察完開始做實驗，省掉等trypsin在室溫升溫 08/29 14:20
15F：→ aaaazzzz: 的時間？ 08/29 14:20
16F：推 babebabe: 我們實驗室也都會分裝到15cc離心管跟medium一起拿去warm 08/29 14:52
17F：→ babebabe: ,在用完之前都不會有切不動的情況發生 08/29 14:52
18F：推 payton103075: 我們以往也都是分裝在15mL離心管 跟medium一同回溫 08/29 15:01
19F：→ michaelhsien: 我們用50mL Trypsin都放37℃回溫，沒差啊! 08/29 19:53
20F：→ michaelhsien: 有些同學忘記，放了幾個小時... 還是可以用XD 08/29 19:54
21F：→ aaaazzzz: 了解，這樣可以減少trypsin放在室溫回溫的時間，謝謝！ 08/29 21:54
22F：推 kg9101266: 我以前跟某博學的時候他也都是和培養液一起回溫 08/30 11:59
23F：→ kg9101266: 只有PBS是用冰的 說甚麼會讓細胞懸浮得較好... 08/30 12:00
24F：推 LIAR: 我trypsin在10cm都用3ml耶？因為怕沒蓋到，1ml不會乾掉嗎？ 08/30 21:41
25F：→ aaaazzzz: 我用兩cc吸掉擺進去,好像還好,拍一下,細胞有飄浮的感覺 08/30 22:35
26F：→ travelmat: 我跟過的lab都分裝後37回溫，聽說太頻繁會失活，但我沒 08/31 07:00
27F：→ travelmat: 遇過 08/31 07:00
28F：→ travelmat: 另外我沒遇過冰的任何液體直接加細胞耶，這樣不是會造 08/31 07:01
29F：→ travelmat: 成stress嗎？ 08/31 07:01
30F：→ blence: 為什麼有需要多加trypsin再吸掉才放37度,何不少加就好 08/31 09:11
31F：→ blence: 多數遇不到失活,是因為加多,加2X濃度,又分裝使用 08/31 09:19
32F：→ blence: 我用完借別人常常放37度幾小時以上的,就需要加幾倍用量 08/31 09:23
33F：→ blence: 如果沒遇到效率變差,請在少量的trypsin試試有無覺得差異 08/31 09:27
34F：→ blence: 一般on-dish lyse 10cm用0.5cc就夠了,trypsin也不擔心覆蓋 08/31 09:32
35F：→ blence: 之前好問兄提問medium最小體積,必竟太少體積生長會不穩, 08/31 09:38
36F：→ blence: 但trypsin少加如果OK,也不用一手續把trypsin吸掉才放37度 08/31 09:42