作者ifam (用三隻手指托腮)
看板Biotech
標題[求救] 冷凍切片的腦組織貼片
時間Thu Jul 16 17:24:49 2015
各位前輩好！
因為我是在新成立的部門受訓，冷凍切片這一方面只有兩天的實作經驗就上場練習了
肌肉和肺我切的效果還不錯，但是在腦組織就遇到了大問題，不管怎麼貼片，就是很容易
產生氣泡或是皺摺......
問過廠商、醫檢師和其他助理，終於從完敗進步到成功率約兩百分之一.....
其他的貼片簡直是慘不忍睹......
想請問有沒有這方面的高手可以指引一下，該如何貼片才能夠減少氣泡和皺摺的產生呢？
我是使用蔗糖濃度梯度脫水，在30%時脫水兩次才進行包埋的。
先謝謝看完文章的各位了！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.246.217.81
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1F：推 goshr: 不要完全切斷, 讓切好的切片回到檢體上, 用毛刷整平再貼07/16 20:16
有喔，這些都有做到，可是很難貼平..我會繼續練習的！
2F：推 eric2853: 看你要不要弄成floating 就是先把sample泡進PBS在貼回來07/16 23:29
意思是把sample溶掉，重新泡PBS一段時間後再用OCT包埋嗎？
3F：推 yuyumom: 收腦的時候有perfusion嗎07/17 10:42
有，我主要是看肝臟變成土黃色的時候就開始收組織了，以PBS灌流後直接取組織放在10%
的福馬林中
※ 編輯: ifam (27.246.217.81), 07/17/2015 11:19:13
4F：推 jack33: 換糖水之前你福馬林泡多久?07/17 13:14
24h
5F：推 eric2853: 不是喔 我是指你把切片切下來先丟PBS 再貼片 可能會比較07/17 15:08
6F：→ eric2853: 不會皺 所以貼合效果比較好07/17 15:08
請問是丟到1X的PBS嗎？可是這樣oct溶掉沒有關係嗎？
7F：推 eric2853: 對不起 我想錯了 因為我之前做腦切片是用agarose包起來07/17 16:48
8F：→ eric2853: 用microtome切 不好意思我說錯了07/17 16:48
難怪XD...因為我剛剛疑惑的試做了一次，結果切片ㄧ離開機器就溶掉了，連檢體都融化
了，正要上來繼續請教您的呢
不過還是謝謝你好心的提供意見喔！
繼續請教各位前輩貼片的手法，拜託拜託了！
※ 編輯: ifam (27.246.217.81), 07/17/2015 16:52:59
9F：推 jack33: eric2853的方法我有看過,一樣是OCT包埋.不過這比較適合07/17 17:06
10F：→ jack33: 切比較厚的情況,好像要20um或30um以上.所以你如果要5um 07/17 17:07
11F：→ jack33: 左右的冷切比較不適合.07/17 17:08
12F：→ jack33: 原PO可以試試看PBS灌流後再用福馬林灌流.然後福馬林泡久點 07/17 17:11
13F：→ jack33: 再換糖水. 我試過灌流PBS再加福馬林.然後24H換糖水. 07/17 17:13
14F：→ jack33: 也試過完全不灌流. 腦取下來後泡福馬林至少三天才換糖水.07/17 17:14
15F：→ jack33: 這兩種方式下來後,切片機開-20度.切3~5um左右還算平整.07/17 17:16
16F：→ jack33: 攤腦組織片時也不太麻煩. 很容易就很在玻片上攤平. 07/17 17:19
17F：→ sunorange: OCT包埋還是可以用floating 我都是這樣用的07/18 11:50
18F：推 vandia: 貼片的時候,以15-20度斜度快速拉起來 07/19 23:32
19F：推 hchung: 原po在哪個單位? 以前冷凍切片切腦或切骨頭都OK~ 07/21 22:36
20F：→ hchung: 若可以現場看的話，會比較知道你的問題在哪裡~~07/21 22:37
因為是新成立的部門，我也很菜，可能比較不方便讓外賓進出。但若是您願意提供作法（
前處理）或是其他意見，我會很謝謝你的！
21F：推 kakaman: 嗯 歡迎站內信 07/22 06:15
※ 編輯: ifam (27.240.55.167), 07/23/2015 11:33:14
22F：推 H75610: PBS灌流後會再福馬林灌流,再用福馬林浸泡overnight,surcos 08/01 01:06
23F：→ H75610: e脫水,OCT包埋前記得把腦上的液體用乾,讓包埋效果更完整, 08/01 01:06
24F：→ H75610: 切片時候腦片會更完整,更容易貼片 08/01 01:06