作者polomi (polomi)
看板Biotech
標題[求救] 詢問利用點突變 deletion primer設計
時間Tue Jun 9 13:48:45 2015
大家好
最近剛把一個質體構築好，
等定序的回覆。
目前是在設計如何將其中一段N端去除，
長度為65個AA，
195的bp，
整個質體大小為3757 bp，
使用的KIT為 QuikChange@Lightning，
http://www.genomics.agilent.com/primerDesignProgram.jsp?&_requestid=212447
有使用這個網站去設計，
他所提供的bp
Primer Name Length (nt.) Tm Duplex Energy at 68 °C Energy Cost of Mismatches
del375-569-an 32 81.62℃ -49.77 kcal/mole 84.90%
del375-569 32 81.62℃ -48.73 kcal/mole 85.22%
想請問後面的兩樹質分別帶別何義?
想請問有人做過類似的點突變的實驗嗎?
有那些地方要多加注意的?
感謝大家了~~~
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1F：→ Ice9: 去除一段就不叫『點』突變了。你可以 google 下關鍵字： 06/09 14:20
2F：→ Ice9: PCR based mutagenesis。我想這應該是你需要的。 06/09 14:20
3F：→ Ice9: 基本上設計的 primer 是在同一區域，去掉你想刪掉的位置就好 06/09 14:22
4F：→ blence: 別管網站設計,直接把del兩端各約16~20mer拼湊起來就是了 06/09 14:29
5F：→ polomi: 其實網站上也是直接拼接起來前後16個bp @@ 06/09 15:34
6F：→ polomi: v想請問那這樣的話 Tm溫度要設多少為佳? 06/09 15:34
7F：→ Dusha: 去掉一段哪叫點突變... 06/14 03:16
8F：→ polomi: 抱歉 可能要說利用點突變的KIT做片段去除的方式 06/14 16:17
9F：推 Ice9: 溫度用預設的就好了。若有問題，可以考慮初始下調1~5度。 06/15 09:43
10F：→ polomi: 感謝您 06/15 10:07