作者ad1980 (GluR1)
看板Biotech
標題[求救] PCR & running gel
時間Mon Apr 27 04:47:53 2015
想請問各位一個關於 PCR 的問題，
就是我最近想要 clone 一個基因，分成兩段 PCR，
就是先用一組 primers (e.g. pF1 & pR1) PCR 前 1.5kb，
然後用另一組 primers (e.g. pF2 & pR2) PCR 後面 1.5kb，
再把兩個 PCR products 當作 template，用 pF1 & pR2 PCR 全長，
結果跑 gel 後出現照片中紅框框的結果。
http://imgur.com/JiRO3bB
請問這是什麼情況呢？
很久以前做有出現過類似的情形，
記得那時候用 PCR purification 後好像變成 band 不見了，
還是沒改善，一樣卡在 well，有點忘了。
那時候沒找出問題出在哪，
沒想到現在又碰到這個情況，
所以想請問一下有沒有人知道什麼情形下會卡在 well 中，
感謝。
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1F：→ zoe77101y: 會不會是序列太長呢？ 04/28 11:10
2F：推 Ianthegood: taq大概是跑到出來長到會卡well的product... 04/28 16:47
3F：→ ad1980: 但是另一個更長的不會出現這個情況，似乎只會發生在 sewin 04/30 02:09
4F：→ ad1980: g PCR，把兩段合在一起時後這樣，如果是一次 PCR 3kb 就 04/30 02:09
5F：→ ad1980: 不會卡 well。 04/30 02:09
6F：→ ad1980: 是否知道如何讓 Taq 不卡呢？之前有想過這個可能性，但不 04/30 02:11
7F：→ ad1980: 知如何解決。 04/30 02:11