作者jmrla (我和你走散了。)
看板Biotech
標題[求救] 有關蛋白表達
時間Wed Apr 22 23:56:32 2015
最近做蛋白表達
使用PET32a質體並以E coli.(BL21)做transform
分別用IPTG和lactose做誘導
IPTG部分:
大概在OD值0.6時加入0.5mM的IPTG
以37度繼續培養
加入後發現細菌幾乎就不再生長了
跑膠結果也發現蛋白沒有表達出來
lactose部分:
分別以28度和27度培養18小時
菌正常生長
但跑膠結果發現蛋白沒有表達出來
無法確定這蛋白是否為毒蛋白
因為此蛋白相關文獻極少
但加了IPTG後會抑制菌的生長
所以也懷疑此蛋白是否會毒殺菌
如果真的會毒殺菌
大概要怎麼調整條件才有可能解決這方面的問題呢
至於lactose誘導則是因為相關資訊不多
不知道有沒有人有相關的經驗可以分享
謝謝:)
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1F：→ blence: 加入IPTG做誘導就是告訴細菌別管複製了,要專心做蛋白阿 04/23 00:20
2F：→ huuban: 會不會是做蛋白的溫度不適合呢？ 04/23 00:37
3F：→ huuban: 之前同事做過有毒性的蛋白是換系統才成功的 04/23 00:38
4F：→ Ice9: 上面可有可辨認的 fanctional domain(s)？重覆序列的 a.a.? 04/24 02:21
5F：→ Ice9: 再要不然就是 Arginine(s) 的比例太多？膜蛋白？ 04/24 02:22
6F：→ Ice9: 另外，加了 IPTG，理論上不會再讓細菌分裂，但通常會多長些 04/24 02:23
7F：→ Ice9: 還有就是有確認construct出來的没有意外的 out-of-frame 嗎? 04/24 02:25
8F：推 ringohare: IPTG induce的時間多長？菌長的慢正常 04/26 16:22