作者gto33456789 (太人生了)
看板Biotech
標題[求救] western的膜在blocking的時候乾了
時間Wed Apr 22 11:10:24 2015
western的膜在blocking的時候蒸發太多, 乾掉了
請問有任何補救措施嗎..
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推 pen88:以前覺得 鬼塚22歲還是處男很好笑 現在我笑不出來 10/19 01:47
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1F：→ kgwu: 用甲醇再活化後wash 這樣應該是OK 04/22 11:13
2F：推 skyken10: 沒關係的～再加ㄧ點牛奶讓他濕就好了！ 04/22 13:18
3F：→ gto33456789: 因為放ON, 早上來看旁邊還有中間部分乾乾的 04/22 13:59
4F：→ gto33456789: 後來再泡到transfer buffer 想說裡面有甲醇 04/22 13:59
5F：→ gto33456789: 現在乾掉的地方 即使浸溼了還是是痕跡 04/22 14:00
6F：推 homeshawn: Blocking overnight不會把想測的抗原也遮蔽掉嘛0.0? 04/22 14:56
7F：→ homeshawn: Blocking overnight不會把想測的抗原也遮蔽掉嘛0.0? 04/22 14:56
8F：→ homeshawn: 重覆推文，不好意思>< 04/22 14:56
9F：→ gto33456789: 之前做的時候 是OK的 單一band蠻漂亮的 04/22 15:12
10F：→ raiyu: 回h版友 做過4度C overnight 不會有影響 只是如果用牛奶不 04/22 23:57
11F：→ raiyu: 建議blocking 超過太久 初心者時放六日 結果牛奶有點臭掉還 04/22 23:59
12F：→ raiyu: 有點分離......囧 04/23 00:00
13F：→ raiyu: ^不要超過太久 04/23 00:01
14F：推 homeshawn: 了解~ 04/23 17:47
15F：推 dehydrogenas: 一樓的你是想害死人嗎 04/24 13:42
16F：推 homeshawn: 樓上怎麼說@@? 04/24 14:30
17F：推 kg9101266: 一樓沒說錯阿 我transfer完或是blocking後都有做過 04/25 21:30
18F：→ kg9101266: 把膜晾乾 收在防潮箱(室溫) 等到要用時再用甲醇活化 04/25 21:30
19F：→ kg9101266: 只是我不知道blocking中途乾掉是不是會有blocking不均 04/25 21:31
20F：→ kg9101266: 的現象 如果是我的話 會把膜晾乾用甲醇重新復水後 04/25 21:31
21F：→ kg9101266: 再blocking30分吧(但我沒這樣做過喔 只是鍵盤分析...) 04/25 21:32
22F：→ kg9101266: 對了...僅限於PVDF 如果用NC 不可以過100%甲醇的 會溶 04/25 21:33
23F：→ kgwu: 痾..我是很認真回答..而且我真的有這樣做過 04/26 13:47
24F：推 alex53001: PVDF 跟一樓一樣作法過 04/27 04:20
25F：推 tynse71864: 剛做完一樓的方法壓p-akt band超棒 04/27 20:16
26F：推 dehydrogenas: blocking完以後把膜晾乾 用甲醇重新復水 再染? 04/30 17:35
27F：→ dehydrogenas: 染得到東西?? 04/30 17:36
28F：推 jsi: 1F說的沒錯，把PVDF說明書就有寫到。membrane乾燥後保存一段 05/01 00:03
29F：→ jsi: 時間，拿出來用Methanol活化，就能再使用，我就這麼做過~ 05/01 00:05
30F：推 kg9101266: blocking完以後把膜晾乾 用甲醇重新復水 可以染到 05/07 10:20
31F：→ kg9101266: 因為我做過所以肯定 05/07 10:20
32F：推 dehydrogenas: 所以你們都跑一次膠 可以染N種抗體? 05/08 15:07
33F：推 tynse71864: 一張壓個10隻抗體都行了吧 05/25 00:25
34F：推 MoMo123: 重複壓 還是需要stripping吧??? 只是方便 不用再跑膠?? 05/27 00:38
35F：→ MoMo123: 還是甲醇過完後 就不用stripping呢?? 05/27 00:38
36F：→ MoMo123: 這樣壓p-akt會比沒風乾的壓好嗎?? 真的好奇 之後要做>"< 05/27 00:39
37F：推 tynse71864: p-akt兩個form我還是會分2張跑 否則會被argue strip 05/28 01:42
38F：→ tynse71864: 不均勻造成差異 05/28 01:42
39F：→ tynse71864: 還有我是不小心讓membrane乾了 才水球一樓k大求救的 05/28 01:43
40F：→ tynse71864: 還是讓他保持濕濕的囉 05/28 01:44
41F：→ tynse71864: 我做出來 膜乾的跟沒乾的訊號差異不大 05/28 01:45