作者jasmineapple (席得)
看板Biotech
標題[求救] 關於promoter assay
時間Tue Apr 21 18:07:13 2015
我想請教對repoter assay熟悉的人, 因為我們實驗室要做promoter reporter 如下圖
http://ppt.cc/~qEE
在promoter後面接mCherry的基因 (或是GFP也可以)
然後把promoter置換成我們研究的promoter
之前實驗室有買commerical的plasmid
但可用的切位少之又少 (像是recommend的切位在insert中也有切點)
很多限制 不知道版上有沒有人有推薦的plasmid
前陣子挖了很多資料 但好像很少是可以置換promoter的 plasmid
謝謝
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1F：→ Bows: luciferase? 04/21 18:59
2F：→ jasmineapple: 不是 是想看mCherry or GFP的表現 因為想在照片 04/21 19:06
3F：→ jasmineapple: 的形式來看。但luciferase應該只能得到一些量化的值 04/21 19:07
4F：→ jasmineapple: 老闆是想看美麗的圖片 哈哈 04/21 19:08
5F：→ blence: 再怎麼麻煩,用site-direct就可以變出你想要的RE site了 04/21 19:27
6F：→ jasmineapple: 是這樣沒錯，但是是想到有很多切位的話，就可以給 04/21 21:56
7F：→ jasmineapple: 之後很多實驗用了 04/21 21:56
8F：→ blence: 其實site-direct之後接MCS進去，就能廣泛使用了阿 04/21 23:59
9F：→ Ianthegood: promoter切掉後做blunt再做t-tailing 做成t vector 04/22 10:32
10F：→ Ianthegood: promoter直接p出來就接進去 04/22 10:32
11F：→ jasmineapple: 請問sticky end產生後如何變成blunt end?thx 04/22 16:17
12F：→ Ice9: 用 Gibson Assembly 的方式來製作呢？聽說不需要 RE sites。 04/24 02:08
13F：→ Ice9: 我個人没用過。 04/24 02:09
14F：→ alexflybaal: 之前用過pGL4,基本上就是MCS接luciferase reporter 04/24 11:29
15F：→ Ianthegood: t4 dna polymerase 04/24 14:14
16F：→ satasumi: pDL LacZ 01/05 06:39