作者t123401221 (沉默玩具)
看板Biotech
標題Re: [求救]WB壓片有雜點和要看的Ab非常weak
時間Sun Apr 19 19:46:19 2015
謝謝各位熱心的推文
但各位的方法
我有試過例如 1抗 O/N 或是blocking O/N
都沒有用還是一樣有雜點和白色或全黑
我有曾經將一抗和二抗拿去離心個幾秒鐘~
但結果沒甚麼變化~
因為目前實驗室沒有多餘的錢可以購入新的Ab
請教各位還有甚麼辦法可以解決的~~~~
感謝各位^^
※ 引述《t123401221 (沉默玩具)》之銘言：
: 請教各位版上的朋友
: 我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7
: 但我壓片出來後不管是多少濃度的Ab 都看不到band
: transfer 都確定protein 都有轉印到NC membrane上~~~
: 而且還會有一點一點黑色的雜點~
: 如下圖
: http://ppt.cc/sN61
: 而我的條件如下:
: blocking 5% milk 1.5hr
: 1抗是1:300 o/N
: TBST wash 10min x3
: 2抗是 1:10000 1hr
: TBST wah 10minx3
: 請各位有甚麼解決之道呢??
: 謝謝各位的協助^^
: 我的一抗是santa cruz這間廠牌的
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1F：→ a90648: 抗體壓不出來就是壓不出來，被你硬弄出東西來你反而要擔心 04/19 21:42
2F：→ a90648: 那東西是真的還假的 04/19 21:42
3F：→ a90648: 這種狀況只能換抗體不要再想別的了 04/19 21:43
4F：→ tz2733: 沒做過NC 用PVDF的經驗是如果用BSA背景會比較少有雜點 但 04/19 21:51
5F：→ tz2733: 也建議換抗體 別浪費時間 04/19 21:51
6F：→ stone1105: 還是你有positive control的sample，去試試看 04/26 16:55
7F：→ stone1105: 能出來是最好，不能出來表示抗體真的有問題，趕快去換 04/26 16:57
8F：→ stone1105: 要不然你消耗耗材跟時間的成本還比去買新抗體還貴 04/26 16:58