作者t123401221 (沉默玩具)
看板Biotech
標題[求救]WB壓片有雜點和要看的Ab非常weak
時間Fri Apr 17 15:45:57 2015
請教各位版上的朋友
我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7
但我壓片出來後不管是多少濃度的Ab 都看不到band
transfer 都確定protein 都有轉印到NC membrane上~~~
而且還會有一點一點黑色的雜點~
如下圖
http://ppt.cc/sN61
而我的條件如下:
blocking 5% milk 1.5hr
1抗是1:300 o/N
TBST wash 10min x3
2抗是 1:10000 1hr
TBST wah 10minx3
請各位有甚麼解決之道呢??
謝謝各位的協助^^
我的一抗是santa cruz這間廠牌的
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1F：→ Bows: 換一家抗體 04/17 15:47
2F：→ Bows: santa的優點只有便宜而已 04/17 15:48
3F：→ kgwu: 建議換廠牌..以前用Caspase3(santa)怎麼做都做不出來.... 04/17 16:17
4F：推 jabari: 聖誕老公公是有名的抗體樂透商 04/17 16:18
5F：→ blence: SC很愛比較有無oe immunogen或FL來確認Ab效果,可是看到隔 04/17 16:22
6F：→ blence: 壁的control lane連個band都沒有,不就是宣告說這Ab不好用 04/17 16:24
7F：→ t123401221: 那請教各位有雜點是甚麼原因造成的呢? 04/17 16:30
8F：→ t123401221: 和下面那一張有些區塊都是白色的???? 04/17 16:30
9F：推 tz2733: blocking為何要1.5h 感覺有點太久 另這三支抗體我作起來是 04/17 19:05
10F：→ tz2733: 整張都是雜band 建議換牌吧 04/17 19:05
11F：推 greendeer: 黑點應該是牛奶或wash solution髒掉了 04/18 12:17
12F：推 greendeer: 白色區塊是ECL反應過度，已經耗掉所有2抗活性，就會剩 04/18 12:21
13F：→ greendeer: 白色，其實那是沒有訊號。你看旁邊都是黑色就知道訊號 04/18 12:21
14F：→ greendeer: 很強，猜想你的二抗大概也搖晃的不均勻 04/18 12:22
15F：推 stone1105: 換抗體 04/18 20:09
16F：推 tynse71864: 抗體吧 但我覺得blocking時間應該還好 04/19 16:48
17F：→ tynse71864: 有時後來不及我都會丟4度 o/n 04/19 16:48
18F：→ kg9101266: 滿天星是不是因為抗體沉澱的關係?我以前也曾經遇過 04/25 21:35
19F：→ kg9101266: 但不知道該怎麼解決 求高手幫解>< 04/25 21:36