作者chaichi (chaichi)
看板Biotech
標題[討論] 數完細胞後如何種細胞?
時間Thu Mar 12 22:14:43 2015
不好意思
我知道,這是一個很蠢的問題
但我還是覺得很困擾
是這樣的
我數細胞的方式是PBS洗過7.8分滿的細胞後
使用trypsin切下細胞
吸到15CC離心管
離心後,吸掉上輕液
因為胚很大
所以我用5CC medium去沖散胚
然後開始使用血球計數器來計算細胞
10ul細胞+10ultrypan blue
假設我算出500顆細胞
我算四格
套入公式=300/4再X2X10000=1500000
那我想要再種500000個細胞進入dish內
請問我要吸多少體積的細胞進入?
是直接1500000/500000就好?
還是我要把我數完細胞代入公式算出的1500000再乘以我用5CC的medium去打散胚
然後再用我想種的細胞數500000/(1500000X5)?
請問是應該用哪一種算法?
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1F：推 wanderchang: 去看一次公式怎麼來的就不會忘了 03/12 23:43
2F：→ blence: 比較5cc或只用1cc去打散,得到的計數細胞數會不一樣嗎？ 03/12 23:44
3F：推 gps0110: 你要種500000的final volume是多少 03/13 00:42
4F：推 gps0110: 用5cc沖散的那些細胞濃度就是1500000cells/ml 03/13 00:44
5F：推 gps0110: 最簡單就是你把那5cc dilute3倍(就是再加10cc media) 混 03/13 00:48
6F：→ gps0110: 均勻之後取這其中1cc裡面就有你要的500000個細胞 03/13 00:48
7F：→ chaichi: 我是要種到6cm的dish內 03/13 03:16
8F：推 gps0110: 那你可以拿1ml的5cc dilute3倍的溶液到6cm dish 03/13 05:46
9F：→ gps0110: 再用無細胞的media補到夠cover整個well的volume就可以了 03/13 05:46
10F：→ trumpet: 算了500顆，公式裡面卻是300/4?? 03/13 14:09
11F：→ cuss3146: 我看完有跟樓上一樣的疑問 還在想這公式和我背得不太一 03/13 14:20
12F：→ cuss3146: 樣... 03/13 14:20
13F：推 gps0110: 300應該是筆誤吧XD 不過這樣變成要dilute 5倍 03/13 18:19
14F：→ chaichi: 抱歉,300那個是筆誤,應該是500去除 03/14 00:50
15F：→ chaichi: 感謝大家的回答,我懂要怎麼辦了 03/14 00:51
16F：推 sunny1st: 算出150000是濃度單位cell/mL，當然是用要種的數目除濃 03/14 14:33
17F：→ sunny1st: 度 500000/1500000才對阿。上面少打一個0 03/14 14:34
18F：推 greendeer: 我通常不會算超過300顆耶，因為太多會不準 04/18 12:27