作者jaren229 (jaren229)
看板Biotech
標題[求救] 永遠跑不漂亮的marker
時間Tue Mar 3 19:13:08 2015
大家好~打給後
我是鳳梨田中的小魯妹
有件事困擾我很久(三個月)
目前擔任助理的我
幫老闆跑colony PCR的膠
marker 總是跑得很奇怪
之前的實驗室從來沒遇過這種怪事
以下是我的實驗條件
塗盤-->挑單一菌落-->Colony PCR(Product size: 0.8kb)
Gel %: 1%(將別人做Gel用剩留在錐形瓶中的，重新微波做新的一片
我們實驗室有夠省)
buffer：1X TBE
100V；25min
結果跑出來變這樣
(同樣的情況發生很多次，但有時候不會)
http://ppt.cc/eZeD
lane2,9是marker
其他是sample
marker只有一罐其他人用都沒問題
我實在是找不出問題在哪
每一次跑都心驚膽跳
跑成這樣根本不能當data用
請各位大大指點指點
順手回一回 救救小魯妹
祝大家實驗順利~~
補充說明
lane2的marker 500k 以下都跑不出來，莫名其妙的消失了
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1F：→ Ianthegood: 個人覺得問題是膠...03/03 19:18
2F：→ xxtomnyxx: Marker 是 commercial ready to use 的還是買 stock 自03/03 20:50
3F：→ xxtomnyxx: 己配的？03/03 20:50
是commercial的
4F：→ guise: sample loading少一點，marker像是被sample擠壓03/03 23:02
sample load 12 lamda
marker load 3 lamda
5F：推 datro: TBE不是0.5X? 有沒有戳到底啊?03/03 23:03
我們家都是用一倍的，學長姐學弟妹用了都OK
6F：→ guise: lane 9看似在loading時把well戳出小洞才在中間拖一條03/03 23:12
我很小心應該不太可能
7F：→ Ianthegood: agarose膠也會有sample被擠壓變形的問題嗎??03/03 23:31
※ 編輯: jaren229 (223.138.152.49), 03/04/2015 07:51:32
8F：推 chaunen: 遇過 似忽是loading dye配方不同 marker和sample之間空一 03/04 07:55
9F：→ chaunen: 格 03/04 07:55
10F：推 keithshih: buffer倒太多gel跑到浮起來了，稍微蓋住膠面即可，妳如 03/06 00:10
11F：→ keithshih: 果跑1hr說不一定1kb的band也不見了 03/06 00:10
12F：推 keithshih: smear應該是熔膠不完全或倒膠時太冷已經有結塊的關係， 03/06 00:17
13F：→ keithshih: 最後如過跑100的ladder膠的濃度可以在提高點，不然100- 03/06 00:17
14F：→ keithshih: 1kb的band跑不開不漂亮 03/06 00:17
15F：推 lyu0001: 微波重複使用很常見阿 可能是製膠槽或凝膠有雜質 03/07 15:59
16F：→ satasumi: 膠的問題,沒有凝好~ 03/16 08:05
17F：推 yfw: 看起來是膠的問題 要小心loading時不要搓破well 05/04 19:15