作者Telcontar (皮皮)
看板Biotech
標題[求救] 總酚含量的測定（分光光度計的使用方式）
時間Tue Mar 3 18:24:54 2015
小弟不知道是不是自己的操作過程錯了，
因為我是照別人跟我說的做，但小弟一直無法重現文獻的實驗結果
請各位幫我看看，謝謝
我是使用總酚含量的測定(Folin-Ciocalteu的試劑測定)，先做檢量線
方法：配置不同濃度的沒食子酸(0~100μg/ml)各取30μl，
加入100μl 2N Folin試劑，接著加入2ml的水，
最後再加入1ml 20%碳酸鈉，放置兩小時後測定其在750nm的吸收度
分光光度計的方法他是跟我說：
blank(當背景)：放入sample + 2ml的水 + 1ml 碳酸鈉 （歸零）
實驗組：放入sample + 100μl Folin試劑+2ml的水 + 1ml 碳酸鈉
請問小弟操作分光光度計有錯嗎？因為做出來的檢量線Ｒ^2=0.9993
但以未知的萃取物換算相對濃度的時候卻跟文獻不一致（差很大）
因為分光光度計他是口頭跟我說的，所以我也不知道我是不是做錯了，
還是背景要放甲醇（我是用甲醇配沒食子酸的）或去離子水歸零？
網路上似乎也沒有詳細的說明分光光度計的使用方式，如果有的話請告知我，謝謝
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1F：→ Ianthegood: blank也要有meoh跟folin 03/03 18:38
2F：→ Telcontar: 不好意思，小弟知識淺薄，如果加Folin那要怎麼比色？ 03/03 18:44
3F：→ Telcontar: 如果加了請問要怎麼比較顏色的變化？謝謝 03/03 18:45
4F：→ Ianthegood: 就看顏色變多少啊 03/03 19:04
5F：→ Telcontar: 對不起，真的不太懂@@ 這樣blank和其他樣品槽差在哪? 03/03 19:27
6F：→ scherzoinb: blank：sample + 水 + 碳酸鈉 + meoh 03/03 20:28
7F：→ scherzoinb: 應該是這樣吧~~~ 03/03 20:28
8F：→ Telcontar: 樣品本身是溶在甲醇中 03/03 21:22
9F：推 payton103075: Blank是把實驗組的sample取代為溶sample的溶劑 03/03 23:21
10F：→ JIM7809230: Gallic acid 溶水也可 03/07 12:29