不好意思因為資訊太少，我想問一些問題便於判斷 : : 如果是失敗的會保留原長度約為1.1KB， 　請問想去除的片段長度多大？ : 是對genomic DNA上的目標基因利用一段具有抗生素抗性基因做取代。 請問是甚麼抗生素基因？使用的互換機制是？ 　（抗生素基因是帶在質體上？或著你送入的是線狀DNA？） 然後你應該是使用在抗生素盤上長出來的菌落去抽DNA、做後續PCR吧？　 : 是不是要再另外購買什麼或是連絡廠商才能打開機器的權限? 　我覺得不像是PCR或抽DNA的問題， 　因為你的control反應很專一，這種PCR你沾一點菌落或菌液直接當模板都做得出來 　 　所以你沒夾出來，我覺得比較可能是 　1. 那些長出來的菌落是污染的雜菌，沒有你primer可認得的序列 　　 （如果你提供詳細實驗流程跟結果： 　　 像是怎麼送入DNA？塗盤後生長菌落數？會比較好判斷）　　 　2. 那些菌落都是insertion mutants，然後你primer座落的位置被互換掉了 　　 （這得看primer座落位置跟整個互換的設計）　 　3. 那些菌落都是insertion mutants，primer也沒錯， 　　 但PCR反應沒有強到可以夾出2 KB大小，所以你可以： (1) 將annealing降到50，沒出來再降到45，再沒出來就放棄 (2) 換別的廠牌的taq，直接測試50跟45度annealing (3) 重新設計其他primer 　　 　　 我想你可以先測試上述的PCR條件， 　　 希望你annealing溫度一降就夾出來，問題解決~ 祝實驗順利 --

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