大家好 小弟有protoplasts染細胞核的問題想請問一下 我目前是採用BiFC 方法看protein和protein間的interaction 用Leica confocal microscopy 觀察 目前遇到的問題是 不管是用Hochest 33342(10mg/ml in ddH2O) 或是DAPI (2mg/ml) 似乎都染不進細胞核 我是取1ul Hochest or DAPI + 9ul的protoplasts sample,放到玻片上30分後觀察 可是有染到的細胞很少,而且有染到核的卻看不到YFP螢光(positive control) (簡單說,有發YFP螢光的細胞染不到核,可我就是要有螢光的 ORZ) 我下plasmid的總量20ug,而我也試過不加plasmid,但一樣染不進核中 也想過換不同濃度,但只是背景提高亮度or 變暗而已 想請問有經驗的大大們,問題出在哪裡呢? 我有想過會不會是細胞太健康所以很難進核? 還是plasmid下的量太多排擠到染劑? (我的plasmid表現在核中) 謝謝~ (p.s.這方式我是照以前的學長留下來做的,但到我手上不知道為什麼會染不出, 問過以前的學長姐說方式也沒問題,so....) --

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