作者dcpick2001 (*劍影*)
看板Biotech
標題[求救] [生化] 一題台大生化實驗題組
時間Sun Feb 1 21:40:45 2015
大家好， 最近寫到一題台大生化的實驗題題組
有點困惑， 問了周遭的朋友幾乎都不會
所以來版上請教一下各位高手們
題目在此
http://ppt.cc/7fDb
有人可以跟我解釋這個實驗的進行大約是在做什麼嗎?
感激不盡^ ^
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1F：推 shelix: 把cDNA(insert)放入vector後做cloning,篩出正確的colony 02/01 22:31
2F：→ shelix: 再用restriction enzyme做double digestion check 02/01 22:32
3F：推 liuse: CBE 02/01 22:39
4F：→ dcpick2001: 感謝> < 但想知道為什麼48是E? 02/01 23:45
5F：→ roy047: 應該lane"4"才是double digestion, 切出1.5kb就是cDNA 02/02 07:26
6F：→ roy047: 錯字不少 02/02 07:26
7F：→ Ianthegood: 為什麼切一刀會有6k跟3k啊 02/02 10:59
8F：→ untilnow: single enzyme 和切一刀有點距離 02/02 11:04
9F：推 yadayada: 好恐怖的英文~抖 02/02 11:12
10F：→ blence: 我也想不出單純NdaI會切出6k跟3k 02/02 11:40
11F：→ Ianthegood: 如果ndei>1, 那ndei+bamhi應該要有3+片段吧 02/02 13:26
12F：推 as862437: 應該是Nde I 在Lane3切位上不只一個，才會有小片段吧 02/02 17:38
13F：→ Ianthegood: 對啊 啊lane4怎麼沒有多出來的片段 02/02 17:52
14F：→ blence: 如果Lane3 NdeI切為不只一個,整個是9k也跟Lane1,3不一致 02/02 18:28
15F：→ blence: 更何況考cloning,選用的RE竟然用非單一site,這是錯誤學習 02/02 18:31
16F：推 ararthur: CBE 02/02 22:19
17F：推 ararthur: 這英文...題組是誰出的阿= = Lan2我還猜想最高的是gDNA 02/02 22:27
18F：→ ararthur: contamination+ nick form, supercoiled form XDDD 02/02 22:28
19F：→ ararthur: 但Lane3的 3k band... 02/02 22:29
20F：→ ararthur: 我曉得了 cDNA上有BamHI site而且還在正中間 所以答案應 02/02 22:31
21F：→ ararthur: 該是CBA(?) 基本上MCS上的cut sites不可能出現在vector 02/02 22:32
22F：→ blence: cDNA上有無BamHI都無法解釋Lane3 NdeI那3kbp的由來 02/02 22:35
23F：→ ararthur: 但BamHI sticky end是可以和一些RE的cut site合的 所以 02/02 22:35
24F：推 ararthur: 概念上合理(?) 有誤可以來討論 02/02 22:36
25F：→ ararthur: 因為cDNA長度3k (所以lane3的最上面是全長9k) 02/02 22:38
26F：→ ararthur: 而Lane4的1.5k位置則是有兩段產物... 不過這變成智力測 02/02 22:39
27F：→ ararthur: 驗了... 02/02 22:39
28F：→ blence: 不管Lane4的1.5k有幾段產物,你還是沒解決Lane3的3k怎麼來 02/02 22:46
29F：→ blence: 至少你應該先假設有兩個NdeI吧....雖然這樣也難解釋其他的 02/02 22:47
30F：→ ararthur: 3k 是cDNA全長 cDNA正中間有個BamHI cut site 所以lane3 02/02 22:58
31F：→ ararthur: 阿 抱歉 謝謝樓上提醒 我忽略應該是有2個NdeI在MCS兩端 02/02 22:59
32F：→ ararthur: (在我的天馬行空假設下) 02/02 23:00
33F：推 ararthur: 阿 我錯了 即使有兩個NdeI BamHI在cDNA多一個 lane3還是 02/02 23:05
34F：→ ararthur: 不合理... 02/02 23:05
35F：推 jabari: 先別說這些... lane 2有3條 ..莊老師有沒教過怎麼辦純化@@ 02/02 23:08
36F：→ jabari: 你要說lane3的3K是super coil我也認了 Lane2那啥? 斷光光? 02/02 23:09
37F：→ blence: 其實Lane2以全長7k來說,supercoil最低出現在近5k是合理的 02/02 23:12
38F：推 jabari: 這樣也算合理啦.. 不過lane3這太威了 QwQ 02/02 23:13
39F：推 ararthur: agree with blence 02/02 23:14
40F：推 shelix: 應該打電話去問...搞不好這題送分(?) 02/02 23:38
41F：→ dcpick2001: 感謝大家的忙^ ^ 02/03 22:56
42F：推 leoblack: 英文真的頗呵...... 02/06 13:35