作者jiuen217 (Pan)
看板Biotech
標題[求救] PCR negative control鬼打牆
時間Fri Jan 16 10:03:44 2015
各位大大好
前天我做PCR的時候，發現negative control有band出現
所以我為了想知道是哪邊出的問題，昨天就測試了幾個negative control
但是結果卻讓我怎麼想都想不通
圖片如下:
http://ppt.cc/YPVH
PCR做法我是將bf和dNTP跟酵素先做pre-mix，再分到其他管
水和引子是一管一管加
一個月前我測試primer condition的時候
用A引子做的negative control跟第二組一樣
但是同樣的reagent用其他引子做negative control就沒問題
這個月做的時候，水已經換新的了(跟一個月前的水不同)
也是前幾天做PCR，用別的引子當negative control就OK
到了前天，用A引子做negative control就不行
但是如果是稀釋的A引子汙染的話
第四組用新的水做negative control就又OK....
而且第一、二組的band還長得不一樣
我真的搞不清是哪裡出問題了....
請大家救救我~~~謝謝
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1F：推 scherzoinb: 就圖中的1，4，我會說水有污染，因為4是正常的， 01/16 10:43
2F：→ scherzoinb: 不妨多作new A primer+new ddH2O，也要是沒有band。 01/16 10:45
3F：→ scherzoinb: 圖3，沒有band，只能說沒有primer可以夾出來的東西， 01/16 10:49
4F：→ scherzoinb: 不妨多作old B primer+new ddH2O，也要是沒有band。 01/16 10:50
5F：推 tynse71864: 同一樓 做一個new primer+new H2O 01/16 12:17
6F：→ blence: (1,2)都有東西,所以水有問題,(3)不同primer效率不同難比較 01/16 13:04
7F：→ blence: 我覺得標題講internal control好像怪怪的 01/16 13:05
8F：→ eric2853: 應該是negative control吧 01/16 13:19
9F：推 ljii: 害我看到internal control就覺得是RT, 進來才發現不是... 01/16 13:41
Sorry打錯，已經改好了
謝謝大家的建議，我會再試試看
※ 編輯: jiuen217 (163.25.92.108), 01/16/2015 13:44:56
10F：推 skyken10: 我好奇你的樣本是原核or真核？ 01/17 17:26
11F：→ jiuen217: 真核，是human的 01/26 10:17