作者gto33456789 (太人生了)
看板Biotech
標題[求救] IHC
時間Fri Jan 16 00:45:16 2015
大家好
最近把自己表現出來的蛋白質 給生技公司打完抗體
開始染IHC
用的是biogenex immunohistochemistry KIT
之前的問題解決了
( 把生技公司附上的兔子normal serum 改成 commerical goat normal serum)
就不是整片陽性singal了
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但現在又出問題了
我的target cell會鎖定在軟體動物的神經上的病毒
但現在不管是染(跑PCR病毒陽性片或陰性)的病理切片
在神經的細胞上都有些許的訊號
導致現在無法確定這抗體的專一性
請問我接下來該如何trouble shooting..
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另一個問題是
我的ㄧ抗是rabbit anti-我的protein
而我的二抗是commerical的KIT裡面的
為什麼再blocking的時候, 放rabbit serum
整片就都上陽性
而改用goat serum就比較正常
照道理我的組織切片不會有兔子血清裡的任何抗體給結合上阿
謝謝大家
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1F：→ blence: 你一抗是rabbit anti-protein,二抗不就是xxx anti-rabbit 01/16 01:09
2F：→ a90648: 你一抗是rabbit 又用rabbit serum blocking?! 01/16 01:17
3F：→ a90648: 二抗下去當然全部中獎阿.... 01/16 01:19
4F：→ gto33456789: = = " 是的.. 01/16 02:22
5F：→ gto33456789: 它那張抗體公司的表就叫我用來稀釋一抗與當serum阿.. 01/16 02:24
6F：→ coswater: 如果病毒確定不會出現在其他動物，可以找別的物種切片 01/17 09:15
7F：→ coswater: 當做negetive control，然後找一片確定有病毒的軟體神經 01/17 09:16
8F：→ coswater: 切片，當作positive，比較看看兩者的差異 01/17 09:17
9F：→ gto33456789: roger that 01/20 11:29