作者Gilver (吳右手)
看板Biotech
標題[求救] in situ 固定時detergent加太少
時間Fri Dec 19 01:06:13 2014
小弟我在做植物的RNA in situ hybridization 時，
不小心在第一步使用的組織固定液4% paraformaldehyde in PBS溶液中
將Tween 20和Triton X100 兩種detergent誤加成原本建議濃度0.1%濃度的千分之一，
但在抽氣固定的時候有將組織充分抽氣滲透 (抽到60mmHg組織才上浮)
想請問各位先輩的意見，如果detergent濃度加低了會不會對雜合結果造成顯著影響呢?
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※ 編輯: Gilver (1.160.85.28), 12/19/2014 01:07:32
1F：推 Ianthegood: 沒有permabilise你的probe怎麼進的了膜 12/19 09:48
2F：→ Gilver: 因為後面還有Protease處理，還會再細胞打洞一次 12/23 21:06
※ 編輯: Gilver (140.112.52.118), 12/23/2014 21:06:33
3F：→ Ianthegood: 如果膜沒破 你protease只吃的到extracellular domain 12/24 00:06
4F：→ Gilver: 那請問有機會在脫蠟後hybridization前再幫細胞打洞嗎？ 12/24 02:35
5F：→ Gilver: 比如說在4%formaldehyde或PBS的缸裡加入triton之類的 12/24 02:37
6F：→ Ianthegood: 你做做看嘛 失敗了就重來嘛 這次就不要搞錯 12/24 22:10