作者dorisaq2791 (dorisaq2791)
看板Biotech
標題[求救] 24 well 怎麼將細胞分勻 ?
時間Sun Dec 7 02:29:36 2014
我有爬過一些文，但不甚了解，而且我的問題跟大家似乎不太一樣@ @
我的問題是將細胞分至24 well 時細胞並不會均勻分布
總是呈現中間較少 旁邊較多的情形
我的作法
將細胞懸浮夜和medium依所需比例混合均勻後放入50cc離心管 以Glass pipet mix均勻
分細胞時也是以GP分 ，每滴3 well 即再度mix
然後就直接送進培養箱了 沒有作其他搖晃
在細胞液體積部分 我是分得很平均的 每個well都很接近
在剛分完時有在顯微鏡下看過，感覺都細胞分佈很平均
不過當細胞貼好，一拿到顯微鏡下就破功了... 中間很稀少，在well邊緣較集中
實驗室學姐說有可能是在滴細胞液時的速度不對
想問大家有沒有什麼想法 ，因為我也不是每次都分的不平均@ @
想知道除了滴細胞夜速度方面是不是有其他問題
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※ 編輯: dorisaq2791 (118.171.191.42), 12/07/2014 02:31:19
1F：→ blence: 前面怎麼mix都沒差,well會分佈不均跟加入well之前動作無關 12/07 02:41
2F：→ blence: 加入之前mix只影響各well細胞數,之後的搖晃才影響分佈 12/07 02:43
3F：→ vetvet: 加入的時候，先在well中間加少量，等每孔都加完了，再調整 12/07 16:11
4F：→ vetvet: 每孔的medium量到所的量，再輕輕的敲一敲，讓細胞散開就好 12/07 16:13
5F：→ raiyu: 最後每well的medium量大約是多少? 12/07 22:14
6F：→ raiyu: 太少容易分布不均(不過比較容易是擠在中間或某區) 12/07 22:16
7F：→ raiyu: 可以像樓上說的 先加部分medium在well中再加細胞液 12/07 22:18
8F：→ raiyu: 最後500ul/well左右 再前後左右輕拍 應該就可以 12/07 22:20
9F：→ dorisaq2791: 1 12/08 00:57
10F：→ dorisaq2791: 抱歉我不太會用b版， 我的細胞液總體積是1ml 12/08 00:58
11F：→ dorisaq2791: 謝謝大家 我會再試試看 12/08 01:00
12F：推 chaunen: 直接滴入well 不要搖 hood裡放個10分鐘等細胞貼 12/08 20:56
13F：→ chaunen: ex:1*10^5 cells in 500ul per well 10個well就配11份 12/08 21:00
14F：→ chaunen: 在50ml tube pipette均勻後吸500ul 滴入well 12/08 21:02
15F：→ chaunen: plate一搖到就GG了 12/08 21:03
16F：→ chaunen: 另外要注意hood桌面的水平 不然會發現細胞密度呈現梯度 12/08 21:05
17F：→ chaunen: well越大越明顯 尤其10cm 12/08 21:06
18F：推 chaunen: 中間少旁邊多應該是medium太少 24well要400ul以上較保險 12/08 21:11
19F：→ chaunen: 搖搖苦手經驗留 12/08 21:12
20F：→ blence: 原po都說總體積1ml了,顯然不是medium太少 12/08 21:15
21F：→ joe0725a: 我以前也遇過，你可以每次入well前先用tip mix均勻 我是 12/24 03:49
22F：→ joe0725a: 總體積超過30mL 我會分兩館 12/24 03:49