作者vantis (凡提斯之貓)
看板Biotech
標題[求救] 用whole blood檢體跑flow
時間Mon Nov 17 20:34:10 2014
flow新手第一次在此發問
想請問各位前輩,若要分析neutrophil surface marker,
whole blood sample如果自採檢後,放置於冰箱冷藏兩天後才進行實驗
是否會嚴重影響到細胞活性?
最近因為上flow遇到細胞都變成debris的問題,完全無法分析~非常苦惱
作法:
1.將antibody mix好
2.加入100ul whole blood, 4℃ incubation 30 mins
3.加入lysis buffer, RT incubation 12 mins
4.1200rpm 4℃ 5 mins centrifugation, discard supernatant
5.加入1 ml staining buffer wash
6.1200rpm 4℃ 5 mins centrifugation, discard supernatant
7.加入500ul staining buffer, suspension pellet
8.上機
reagent都是BD commercial
最近做flow結果時好時壞,不是很穩定~真的很苦惱啊!
不知道有沒有什麼小罩門可以傳授
非常謝謝大家解惑喔!
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※ 編輯: vantis (111.243.240.232), 11/17/2014 20:39:35
1F：推 jabari: 檢體新鮮 標完抗體 fix完再放冰箱 放兩天有點久?? 11/17 21:29
2F：推 qiet: 冰兩天一定爛光光阿，染完用2%PFA固定吧 11/17 21:39
3F：→ saviora: 細胞不固定放這麼久當然破給你看 11/18 00:40
非常謝謝各位回答!
因為目前主要卡在檢體供應端的地方
也就是有時候我拿到檢體的時候已經放置兩天左右
老闆會覺得放一天還做得出來,放到兩天影響會這麼大嗎?
不過從推文看起來,看起影響真的不小!
所以...只好去跟老闆好好談談吧XD
※ 編輯: vantis (111.243.240.232), 11/18/2014 05:16:27
4F：→ yuasa: Neutrophil幾個小時候就開始死了啦，況且你又沒做任何處理 11/18 20:57
5F：推 theonedelete: 試過放一天，勉強可以，兩天就完全不行了 11/18 21:16
6F：推 lesswind: cell放超過6小時就要固定了...不然就會壞掉了QAQ 11/20 23:02