作者Egbertkuo (Egg)
看板Biotech
標題[討論] 關於plasmid extraction
時間Thu Nov 6 15:14:14 2014
各位板友大家好，
是這個樣子的，
由於我們實驗室抽plasmid方式有兩種!
一種是傳統的Alkaline lysis method
我們用來做contruction check使用；
另外一種就是用一般commercial kit做~
我們發現用傳統法抽的濃度用Nano drop 1000測
約莫是用Kit抽濃度的十倍~
但是跑1% agarose gel時
發現好像Alkaline lysis抽出來的量雖然很高，
但量卻跟實際跑膠的濃度差十倍～
假設來說已Kit抽出來為基準，
我loading 1000ng(Alkaline lysis)≒ 100ng plasmid(kit)
我們老師以前不是用nano drop 1000
所以老師覺得我們這樣測出來有點點奇怪，
但我們實驗室大家討論很久還是不太知道為什麼？
Nano drop 設定上有什麼特別導致這樣方式有差嗎
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1F：推 aceliang: 傳統方法有用RNaseA處理嘛? 11/06 15:35
2F：推 chenmick: kit有過resin,應該比較純,濃度則以比跑膠為準 11/06 15:41
3F：→ chenmick: 我用傳統法抽plasmid,為了定序再用kit通resin,濃度也是 11/06 15:42
4F：→ chenmick: 10倍 11/06 15:43
5F：推 Ianthegood: 只能說 nanodrop不準XD 11/06 18:11
6F：推 KittyGod: 直上Qubit 11/06 21:27
7F：推 datro: nanodrop 230nM很高嗎? 11/08 02:30
8F：推 tynse71864: nanodrop不準+1 建議跑膠看 11/09 21:02
9F：→ Egbertkuo: 有加RNase A，我們用kit抽出來band跟跑膠比較像，傳統 11/14 18:52
10F：→ Egbertkuo: 我們也覺得很奇怪 11/14 18:53
11F：推 satasumi: nanodrop不是很準,用QUBIT 或分光光度計吧 12/03 14:01