作者goodday06 (goodday)
看板Biotech
標題[討論] 關於細胞Total DNA 萃取的問題
時間Sat Oct 25 13:24:49 2014
gDNA 或是Total DNA 萃取，
如果是用Kit 抽可以得到很漂亮的singale band (約位在1kb marker 所有band 之上)
然後拉出微弱的smear 到下面。
最近我試了幾種buffer 用Phenol/Chloroform 萃取，
有的情況DNA smear: 大約從2kb 拉到底下的smear
有的情況是DNA 完全 degrade: 約在200bp 左右出現大坨band
想請教的是:
1. 為什麼用kit 抽出來是很漂亮的single band?
是因為gDNA 太大所以擠成一條band 嗎?
2. 若DNA 萃取樣品主要呈現Smear, 表示protocol 不好，萃取失敗嗎?
先感謝分享指教
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1F：推 KittyGod: 用Kit不加RNaseA抽 有時低bp處也會有大駝band 10/25 14:53
2F：→ Ianthegood: 用p/c/i抽如果不要傷得太嚴重也不太會smear 10/27 01:00
3F：→ Ianthegood: integrity吧 10/27 01:00
4F：→ xxtomnyxx: 好像有些 Kit 上有註明 kit 抽出來的 DNA 是 30~50 kb 10/27 23:38
5F：→ xxtomnyxx: 的片段？ 10/27 23:38
6F：→ silverberry: QIAGEN 的 DNeasy 抽出來主要是 30 kb, 但 up to 50 10/29 04:35
7F：→ silverberry: kb, 一般分析都可以用，如果要 > 50 kb 就要另外挑 10/29 04:36
8F：→ silverberry: kit 或是 ethanol (isopropanol) 沉澱小心抽了 10/29 04:37