作者ffmichael229 (御琉光)
看板Biotech
標題[求救] RAW264.7的細胞體外減緩過敏實驗的實驗設計
時間Wed Oct 15 16:01:09 2014
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
目前實驗的設計是想做細胞體外減緩過敏的實驗，實驗已選定某種成分做為材料，希望
這種成分能有減緩過敏的效果，因此就想看某些細胞激素(cytokine)的分泌狀況(例如:
IL-10 IL-4)，實驗的主要的設計是先以藥物溶液(藥物溶液已用MTT抓過濃度)處理RAW
細胞24小時(對照組就不會進行藥物處理)，接著加入LPS進行誘導，然後希望看到有經
過藥物先行處理的組別能夠在於細胞分泌IL-10或者IL-4的表現量有所下降，用以証明
藥物處理能夠有減緩過敏的效果，但是問題就來了，在網路搜尋文獻的過程中，有遇
到LPS要一同添加IFN-r的文獻，也就是LPS+IFN-r，我知道那個是要誘導RAW細胞(NO-t
ype)產生NO所添加的東西，但由於我並沒有很深的相關背景，所以並不了解IFN-r的添
加與否會不會對我的細胞激素表現實驗造成影響，因此第一個問題想問問若我的實驗單
純只以LPS進行誘導是否OK?? ，另外也想請問LPS的用量會是多少比較合適?
由於參考許多文獻 從1ng/ml~10ug/ml都有，不過我目前是打算採用1ug/ml，
這部分也想請問各位前輩的意見，感謝!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.243.232.3
※ 文章網址: http://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1413360071.A.AB7.html
1F：推 RickyKckao: IFN-r絕對會影響cytokine表現 像是induce TNF-a等 10/16 11:22
2F：→ RickyKckao: 要看你實驗的目的來決定要不要兩個都加 如果兩個都加 10/16 11:22
3F：→ RickyKckao: 跟單獨加 要看的意義不同 那是要看有沒有syngernize 10/16 11:24
4F：→ RickyKckao: 或是會有antagonistic effect 10/16 11:25
5F：→ RickyKckao: LPS的用量沒有絕對, 你可以自己在做個titrate抓最適合 10/16 11:27
6F：→ RickyKckao: 看cytokine表現的條件 10/16 11:27
7F：→ RickyKckao: 另外單獨只看IL-10跟IL-4的表現 來決定藥物是否有效 10/16 11:31
8F：→ RickyKckao: 可能不是很洽當 IL-10是anti-inflammatory cytokine 10/16 11:31
9F：→ RickyKckao: 如果藥物讓IL-10的表現變低了, 那也有可能造成更嚴重 10/16 11:32
10F：→ RickyKckao: 的過敏 的確許多過免都是偏向Th2 response 但你可能不 10/16 11:33
11F：→ RickyKckao: 能單單只選幾個M2的代表性cytokine來show藥物的功效 10/16 11:34
12F：→ RickyKckao: 再者 LPS+IFN-r 會誘導M1基因的表現 那你想測的IL-10 10/16 11:37
13F：→ RickyKckao: 跟IL-4可能就更不好測了... 10/16 11:37