作者silverberry (平行線上的交集....)
看板Biotech
標題[求救] Gateway cloning
時間Sun Oct 5 01:35:22 2014
大家好，
我之前做 cloning 都是用 restriction enzyme 剪接法，
但是因為這次的 target vector 只能用 gateway，
所以第一次使用這個方法。
在 invitrogen 的 manual 裡面建議，
pENTR vector 要用他們的 PureLink™ HiPure Plasmid Midiprep Kit 純化。
而且不建議使用 Mini-prep (alkaline lysis)。
但是我看了這套 HiPure 的 manual，
裡面也是 alkaline lysis，只是不是用 spin column 而已。
請問各位使用過 Gateway® LR Clonase II + Enzyme Mix 的版友，
我一定要換純化 vector 的 kit 嗎?
謝謝 m(_ _)m
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 134.84.54.178
※ 文章網址: http://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1412444126.A.D5E.html
1F：→ blence: 只是建議用他們自家產品而已,沒有說不適合用其他miniprep 10/05 03:50
2F：→ blence: genemark, viogene的miniprep用過也都ok 10/05 03:52
3F：→ turtle24: 就我的經驗用其他牌也可以做 gateway 影響應該不大 10/05 04:16
4F：→ silverberry: 感謝樓上兩位~ 10/05 08:25
5F：→ silverberry: 另外請問，如果我的 insert 是 pENTR 的兩倍大， 10/05 08:26
6F：→ silverberry: 我還是用他建議的 insert:vector = 0.5-2:1 嗎? 10/05 08:26
7F：→ silverberry: 還是應該反過來? 10/05 08:27
8F：→ blence: I:V=0.5~2:1，你把兩者反過來不是也是0.5~2:1? 10/05 12:47
9F：→ Ianthegood: 是分子量不是重量喔 10/05 18:07
10F：→ silverberry: 喔不好意思，我沒說清楚，我是手冊上寫 molar ratio 10/05 22:30
11F：→ silverberry: b 大真是一語驚醒夢中人~ 10/05 22:31
12F：→ silverberry: 不過因為 pENTR 我都加 1 uL，所以是調整 i 的量 10/05 22:31
13F：→ silverberry: 所以沒想清楚 @ @ 10/05 22:31