作者REIDO (NEET)
看板Biotech
標題[求救] 新買的NC膜泡到buffer會變波浪狀
時間Thu Oct 2 23:35:43 2014
我之前和北極光買了新的Amersham的NC membrane
http://ppt.cc/S99S
http://ppt.cc/PnIg
原本裡面是用鋁箔袋裝的，光是拿出來就要費很大的勁。我和學弟各自切了
自己要用的份，就各自用各自的。
不過真正讓我傻眼的是，一放到transfer buffer裡面，就變成波浪狀了。
http://ppt.cc/pAMk
http://ppt.cc/INwI
實際用UVP拍可見光。
http://ppt.cc/Wn42
http://ppt.cc/XSfw
左邊是Amersham的NC，右邊是PVDF。可見光可以看到中間的NC有奇怪的痕跡，
NC中間較大的那張靠右也有痕跡只是較輕微。
實際觀看的感想，有點像是好幾層紙疊在一起，但是中間有幾張有裂縫或是水痕的感覺。
http://ppt.cc/yBsP
http://ppt.cc/D21D
結果ECL一加上去，N-cadherin中間就亂成一團，相對右邊的PVDF就好很多。
拿出來看就會注意到ECL沒有均勻蓋上，NC很明顯會凸出來。就算把ECL
加滿也一樣(雖然有人不建議，但是我們實驗室一直以來蓋滿ECL都沒有問題)。
接下來是另一次的NC結果，左右都是NC。
http://ppt.cc/PQO5
http://ppt.cc/-aND
看最大張的部分，左右兩組都有和上面一樣奇怪的水痕，
左邊那個原本就幾乎沒訊號，而右邊也有不均勻的現象。
http://ppt.cc/CUvd
http://ppt.cc/3Ju3
上面是冷光，下面是和白光疊合，右邊上面的訊號消失了。
中間和右邊的兩張，其實是上一組最右上邊的膜，我剪開後繼續染兩個抗體。
訊號消失的位置一樣。
我猜在曝光時間長的時候，膜凹凸不平造成ECL分布不均，可能會是出事的理由之一，
另外那個痕跡也可能是NC內部結構已經損壞，會不會造成較大的縫隙讓protein抓
不夠，或是反過來卡雜質就無法判斷了。
請問有人有買同一牌的NC膜嗎？有沒有遇到同樣問題，這要怎麼解決？
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小黃小黃別生氣，明天帶妳去看戲。
我坐椅子妳坐地，我吃雞腿妳啃骨。
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1F：推 abcam: 和代理商反應 換一捲最快 10/03 07:34
2F：→ abcam: GE的轉漬膜 也是其他公司代工的，賣這麼貴 真的沒道理。 10/03 07:35
3F：→ REIDO: 我的幾個月的sample就這樣升天了。 10/03 13:54
4F：推 lail: 我用過其他牌的...發生過，後來懷疑是methanol造成的，不過 10/04 21:44
5F：→ lail: 證實，但也不敢再用了 10/04 21:45
6F：→ blence: NC裁好先直接泡methanol? buffer? 或是H2O? 10/04 22:22
7F：推 kakaman: nc泡在transfer buffer,直接泡在Me OH會皺掉吧 10/05 16:29
8F：推 kaoru7568: 應該PVDF才要泡MeOH吧，NC感覺本身就親水了 10/06 09:33
9F：→ a90648: NC泡MeOH會縮成一團 10/07 12:13
10F：推 machin: 推直接客訴處理會比較快!GE的是併購Whatman來的,品質應該 10/07 18:09
11F：→ machin: 不差才對 10/07 18:09