作者polomi (polomi)
看板Biotech
標題[求救] gene knockout on E. coli Chromosome
時間Sun Sep 7 15:41:40 2014
主要是想研究在E. coli上的某個特殊蛋白，
而需要先將選定的E. coli上 Chromosome做knockout的動作，
之後再做point mutation後，
用plasmid 送回去表現，
並做生化相關的實驗觀察變化。
目前主要是卡在第一階段上對E. coli上的knockout上，
以前只有念過相關原理，
但從沒有做過這類的實驗。
我有參考一些資料和一篇論文，
http://ppt.cc/pvFb
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10829079
也有找到一些相關的KIT網頁，
http://ppt.cc/uEIq
http://ppt.cc/auBu
因為我是我們實驗室第一次做這個實驗的方法，
想請問有沒有人有做過相同的基因剃除實驗，
有沒有推薦的KIT組，
或是操作方法的變化，
或是實驗上要注意的細節提醒。
感謝大家了。
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1F：→ Ianthegood: 做下去就知道了 細菌比真核好做很多 09/08 01:21
2F：→ Invec: 帶抗生素KO的片段PCR後要做挖膠 如直接把產物作clean up 09/08 03:29
3F：→ Invec: 之後你再轉進E.coli的時候會連原本帶抗生素的質體都轉進去 09/08 03:29
4F：→ polomi: 抱歉 主要是想請問有沒有願意分享protocol或是推薦的KIT 09/08 09:52