作者shinchenboy (欣承男孩)
看板Biotech
標題[求救] 凍MCF10A細胞
時間Sat Sep 6 13:37:57 2014
想要詢問有關凍MCF10A細胞的問題
是這樣的
前幾天我把之前我凍的MCF10A細胞從液態氮拿出來解凍
結果隔天發現細胞幾乎飄起來.........
而我之前也有用相同的方法解凍MCF10A細胞(這批不是我凍的)
隔天看細胞生長的狀況很良好
所以想必大概是我凍細胞的過程哪裡出了問題
我凍MCF10細胞的流程如下
細胞用PBS wash後 用trypsin打下來
等待10min左右後
接著用medium(兩倍trpsin量)來終止反應
然後離心(600 rcf 5min)
然後開始配置凍細胞的medium
比例如下 medium:DMSO = 9:1(細胞大約凍1/3 10cm dish的量)
總共是1ml
最後我把凍細胞的管放進漸凍盒 放進-80度冰箱
隔天再把細胞移置液態氮筒中
流程差不多是這樣 結果解凍後細胞都飄起來了
不曉得版上有沒有高手可以解除小弟的困擾
謝謝~
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1F：推 ko363630: Trypsin太久了，改用FBS:DMSO 09/06 15:29
2F：推 gps0110: 加FBS 09/06 18:25
3F：推 moon0126: trypsin 作用太久了，可以試7%DMSO 09/06 23:42
4F：→ yuyumom: 配DMSO凍液的時候有先讓他放熱完再用嗎?? 09/07 09:44
5F：推 leptoneta: 你沒放-20半小時就直接放進-80? 09/08 00:40
6F：→ leptoneta: 而且要加至少5%的血清 09/08 00:42
7F：→ utadalove: 有漸凍盒,可以直接放-80 09/08 12:42
8F：推 j2g014: 10min 太久囉！！ 09/08 15:16
9F：推 mesenchymal: 雖然要看trypsin濃度，但MCF10A本來就需要比較長時 09/08 20:58
10F：→ mesenchymal: 間的trypsinization,10-15min都是正常範圍 09/08 20:58
11F：推 mesenchymal: 建議看一下ATCC的protocol 09/08 21:00
13F：→ grox: 照做一次看看吧 09/09 10:40
14F：推 stormcorn: DMSO凍液可以放在冰降溫 09/09 15:04
15F：→ hsinhsien: 我不會讓trypsin作用到10分鐘耶!! 09/13 16:09
16F：→ chvkimo: trypsin 還是要看濃度決定時間, 漸凍盒有先回溫到室溫 ? 09/16 00:03
17F：→ chvkimo: 凍細胞的DMSO 7~10% 應該都可以, 但是我都是用含10%的FBS 09/16 00:05
18F：→ chvkimo: medium 在加 DMSO後,先插冰上預冷,因為DMSO加到medium中 09/16 00:06
19F：→ chvkimo: 會放熱,可能會先把細胞傷害到 09/16 00:06