作者a0976134 (帶螞蟻散步)
看板Biotech
標題[求救] 有關於酒精回收失敗的因素
時間Tue Aug 26 01:21:54 2014
各位研究生好 最近我有在做酵素截切DNA的切膠回收
但最近在做酒精回收卻出現匪夷所思的問題想各位請教
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酵素雙截切後跑膠有出現我要的band
加入3倍體積99.5%酒精和1/10體積的3M NaOAc
搖晃時溶液內有出現絲狀現象
-20度冷藏1小時以上後4度 12K轉速 10min
有出現白色固體沉澱 70%酒精wash過後也還在
再加水(20ul)回收前還確定pellet還在
也親眼見到pellet回溶於水中
但是跑膠卻沒出現band 測DNA值也非常的差
請問是哪個步驟有問題?或是需要多加哪個步驟比較好?
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1F：→ Ianthegood: 以前有做過嗎 08/26 10:24
2F：→ a0976134: 之前常做 通常有出現PELLET時 DNA量跟品質都不會太低 08/26 18:44
3F：→ a0976134: 但是有時卻出現有PELLET 但回溶後值都很低的狀況 08/26 18:45
4F：→ svc1213: 用什麼回收 08/26 23:54
5F：→ micocat: 先加酒精還是NaOAc 08/28 01:01
6F：→ Ianthegood: 如果要產量 -20就擺o/n 08/28 13:25
7F：→ Ianthegood: 離心60min+ 08/28 13:25
8F：→ skyken10: 可能水髒了，改用TE(10,1)回溶～ 08/29 21:46
9F：→ satasumi: 片段SIZE多大? 09/02 19:45
10F：→ a0976134: 電泳回收+酒精沉澱(先加NaOAc) 09/03 11:56
11F：→ a0976134: 500bp以下 09/03 11:56
12F：推 tynse71864: 如果沒有要直接往下做不要用水吧 09/11 21:54
13F：→ satasumi: 你是在做切膠回收,還是剩餘DNA樣品回收?? 09/29 00:25