作者tynse71864 (tomosuke)
看板Biotech
標題[求救] DNA 跑膠 capacity
時間Tue Aug 12 13:16:17 2014
想請問一下
一般 Agarose gel (1%) 小片膠 (6個well)
跑多少sample最適當呢?
-----------------
我要做DNA recombination
其中的insert 來源是用maxi-prep的plasmid
(切2刀後會有5000+500的band)
跑RE digestion(total volume 25ul) 後
加入loading dye (6.25ul ，所以整管體積會有32ul左右)
我是直接把整管加進6 well 的小膠跑
上面5000多的band則是很胖(大概從1kb marker 4000~6000的寬度)
500bp則是不太明顯 或很淡
之後跑gel extraction產量也很低
我一直以為是enzyme沒切好/壞掉/東方神秘力量
今天跟老師討論才知道跑膠有capacity這件事
那請問一般6 well的gel大概多少DNA去跑會比較適當呢?
(之前老師有說 把3個well挖在一起跑
我當初單純以為只是怕sample會滿出來.....
謝謝~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.32.9
※ 文章網址: http://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1407820579.A.E37.html
1F：→ blence: total volume 25ul含多少plasmid？ 08/12 13:23
2F：→ blence: 看不懂所謂well capacity指的是DNA總量,或sample體積 08/12 13:25
3F：→ supray: 0.5K會看起來比5K淡是正常的,相同莫耳數下 質量比約 10:1 08/12 13:28
4F：→ supray: 6 well的total量下到 1~2ug 都還OK 08/12 13:29
5F：→ tynse71864: 2 /25 08/12 13:36
6F：→ tynse71864: 我想問DNA可load的總量 08/12 13:39
7F：→ tynse71864: 太多resolution會不好吧？ 08/12 13:39
8F：→ tynse71864: 但不知多少比較好 08/12 13:39
9F：→ supray: 如果你切了2ug DNA全部跑下去,你大概能回收150ng~200ng的 08/12 13:41
10F：→ supray: 500bp DNA 08/12 13:41
11F：→ KittyGod: 5000bp的亮度>500bp很正常啊 08/12 14:50
12F：→ soom: well的容積可以自己用尺量並計算得知，也跟膠的厚度相關 08/12 15:29
13F：→ soom: 咦?我看錯了，不要理我 (另，2ug/well 應該不會有什麼問題) 08/12 15:33
14F：→ tynse71864: 我知道5000會亮很多 但我5000上面 （超過 marker 10kb 08/12 16:28
15F：→ tynse71864: 還有奇怪的雜band 08/12 16:28