作者hahabighan (海綿飽涵 吃不飽)
看板Biotech
標題[問題] western blot 跑膠疑問
時間Mon Aug 11 15:22:44 2014
最近開始做western遇到很多小疑問
因為新的實驗室學長說的方法跟我以往做的方法有所差異
所以想問問大家學長說的是對的嗎?
1. 蛋白收完(溶於sample buffer中)只要在第一次使用時加熱
之後跑膠前就不用在加熱了
因為SB中有某些物質可以使蛋白維持一級結構
2. 為了防止蛋白在load入well後漂走所以一開始電壓要開大一點
學長都是 上膠 200V 下膠 100V
請大家為我解答一下 感恩~
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1F：→ milkpa: 1.看配方2.我的經驗是相反，200V跑stacking不怕沒對齊？ 08/11 15:32
2F：→ roy047: 2.相反+1, 到resolving下膠時才能加速... 08/11 16:13
3F：→ roy047: 1.的話是SDS會附在蛋白上 08/11 16:14
4F：→ blence: 1.可參考你們的protein marker使用說明,為什麼-20拿出來 08/11 17:16
5F：→ blence: 要先熱一下;2.protein會飄走,是他的sample buffer配方有誤 08/11 17:20
6F：→ Ianthegood: 1應該是指DTT 但是這東西會慢慢被空氣degrade 08/11 19:57
7F：→ wanderchang: 同1f 08/11 20:51
8F：推 greenwind: Protein marker上註明不需再加熱…… 08/12 09:34
9F：推 gps0110: 2相反 08/12 15:37
10F：推 ringohare: 2相反 08/12 20:37
11F：推 westterry170: 2相反+1 08/19 10:30
12F：推 mars52013146: 2相反+1 08/27 12:24