作者EDONIS (ED)
看板Biotech
標題[求救] 膜蛋白用一般SDS PAGE跑
時間Tue Jul 1 04:32:19 2014
正常養菌過夜，5ml的菌液IPTG誘導表現後，直接波音波破菌約5分鐘，
打一秒停一秒，後以10000 rpm於4℃離心15分鐘，用300μl PBS回溶
拿30~50ul跑SDS PAGE，跑出來可以看出有表現!!該怎麼解釋??
一般膜蛋白有可能這樣就出現嗎??序列分析出是GPI-AP!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 123.195.12.212
※ 文章網址: http://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1404160341.A.07C.html
1F：推 biingru:10000轉離心15分就有膜蛋白真的有點神 07/01 09:29
2F：推 tsubasawolfy:不是用IPTG去induction了?還是你覺得這東西會出現在 07/01 09:51
3F：→ tsubasawolfy:細菌表面? 07/01 09:51
4F：→ KittyGod:膜蛋白應該要特別去分層才會分得開 一般操作都是混在一起 07/01 11:29
5F：→ storm780121:inclusion body? 不過應該不溶PBS才是 07/02 14:18
6F：推 leoblack:膜蛋白因為transmembrane部分是疏水性,所以需要detergent 07/02 16:41
7F：推 leoblack:幫助才能從inclusion body中拉出,不然會全卡在well上 07/02 17:10
8F：→ leoblack:至於要哪種detergent則要試 07/02 17:10
9F：推 abcm1042:用波音波應該也打不出 你應該也需要detergent SLS? 07/02 17:26
10F：推 leoblack:之前看學姐做是用microfluidizer破菌的 07/02 19:18
11F：推 silverberry:上清液有跑嗎? 如果沒意外的話上清應該也會壓到 band 07/09 09:59
12F：推 silverberry:如果沒有的話，那 PBS 回溶的那部分是 inclusion body 07/09 10:15
13F：→ silverberry:的機會比較高。 07/09 10:15