作者coooo77 (RabiCat)
看板Biotech
標題[求救] 粒線體難以觀察
時間Sun May 25 18:17:03 2014
各位前輩好，第一次在這邊發文，若有冒犯請多多包涵
小弟目前實驗要將有綠螢光蛋白(GFP)標定的粒線體注射到SD Rat的脊椎腔(spinal cord)
與坐骨神經(sciatic nerve)中觀察。老鼠犧牲後包埋切片，用螢光抗體針對GFP染色。
目前困擾的地方是由於粒線體實在太小，無法分辨說哪個部分確實是注射的粒線體；此
外顯微鏡最高也只能放大400倍；另外一開始使用綠螢光二抗去觀察粒線體，結果發現
神經組織中也會自己發出綠光，所以換了紅螢光二抗觀察，但結果跟使用綠色螢光二抗
效果差不多，檢體上面都是一點一點的螢光(星光閃閃的樣子)。
目前想說是否在注射粒線體前用MitoTracer標定，但仔細想想原本的粒線體已經
有GFP了，再標定感覺很多餘。此外我待的實驗室也沒人用過MitoTracer。
查了biotech版上也沒有查到類似的問題，故上來提問，懇請賜教，謝謝!
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1F：→ fatstan:Confocal?? 05/25 20:25
2F：→ Ianthegood:換二抗也有? 一抗專一性不夠? 05/26 00:12
5F：→ coooo77:型號是 Olympus BX40 05/26 10:53
6F：→ fatstan:我的意思是 用confocal去拍會比較清楚 05/27 11:18
7F：→ coooo77:confocal在我的實驗室是公用儀器,使用的話要一個月前預約 05/27 20:40
8F：→ coooo77:使用上會比較不方便 故想找比較簡便的方法 畢竟有很多檢體 05/27 20:41
9F：→ coooo77:要拍照 05/27 20:42
10F：→ fatstan:我有個疑問 為什麼你一開始用GFP標定粒線體 05/28 11:12
11F：→ fatstan:後來又要用抗體偵測GFP GFP本身就會發光吧 感覺怪怪的 05/28 11:15
12F：→ fatstan:換個不會發光的Tag是不是比較好?? 05/28 11:18
13F：→ fatstan:有試過切片後直接拍嗎?? 05/28 11:46
14F：→ coooo77:首先,標定的粒線體是跟合作的實驗室拿的,有紅光綠光兩種; 05/29 00:14
15F：→ coooo77:接著切片後直接觀察也有做過,但發現組織本身就會發綠光.目 05/29 00:16
16F：→ coooo77:前打算換成紅光粒線體或染BrdU標定看看. 05/29 00:20
17F：→ fatstan:我認為Confocal還是預約比較好 找有經驗的人幫你會比較快 05/29 09:12
18F：推 fatstan:用ㄧ般的螢光顯微鏡拍很容易因為螢光太強而干擾實驗 05/29 09:16
19F：→ fatstan:在預約到之前 你可以試試你說的那些 05/29 09:18
20F：→ coooo77:謝謝前輩的建議 我會先試試看前輩講的方法,如果有進展再 05/29 10:15
21F：→ coooo77:來推文 05/29 10:16