※ 引述《pandagod (熊貓在這兒)》之銘言： : 請問有沒有人有這種經驗的? : dissect組織下來後通常第一天要使用PFA 隔夜 來FIX組織 : 但是昨天做實驗 最後竟然忘記換PFA 一直把他泡在PBS : 今天早上才發現... : 看到組織都有點軟趴趴的 : 想請問對後續的分析是否會造成影響 (免疫染色之類的) : @_@ : 請求前輩的經驗談 感謝 這真的很難說 要看你組織degrade的速度如何 如果是enzyme多的組織像是胰臟和腸黏膜之類的可能已經分解的差不多了 再來就是你pbs的滲透壓是不是有調到比較等張的情形 這樣泡一整晚細胞也不會膨脹炸掉 另外還要考量到你所要偵測的抗原蛋白degrade的速度 有的很慢才會被分解掉 像是myoglobin類的 這個基本上屍體死了兩三天了 還是染的到 但有的蛋白也很快就分解掉了 保險一點我是建議用PFA固定完之後先做張H&E觀察看看細胞型態 看看是否還正常 畢竟你之後要觀察的蛋白也是在細胞的某些部位表現的 如果細胞在H&E下面都看不出型態了 就算染IHC染的到 你也沒辦法判別該抗原到底在哪裡表現出來的 一點建議給您看看 --

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