作者gto33456789 (太人生了)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質純化(BL21)
時間Fri May 16 00:16:10 2014
大家好
小弟我用BL21 pET24a insert一段12.1Kb的蛋白進去
在做小量50ml,測試條件pretest的時候, 蛋白超粗超厚
做完wertern也確定是his-tag
之後做大量養1L時候, 蛋白就產量不高, 越來越淡
是我的菌不純嗎...還是...
感謝...
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1F：推 vetvet:shaker的轉速(或是要叫'扭力？')，也要跟著體積放大！ 05/16 01:00
2F：→ vetvet:否則空氣不夠，就會長不好~ 05/16 01:01
3F：推 ko363630:發酵的做法 跟小量的做法不一樣 當然會變低 05/16 01:49
4F：→ rurucherry:轉度跟搖瓶大小都可能有關唷 05/17 01:08
5F：推 abcm1042:菌夠多嗎? 養的菌是第一代還是挑菌再塗盤第N代 05/17 04:38
6F：→ ninetoweregg:蛋白產量不高是指整體還是上清液的soluble不多?? 05/18 10:05
7F：→ jsi:破菌完全不完全也會影響，曾改用French press破菌，產量增加 05/18 22:31