作者bear2926 (大能)
看板Biotech
標題[求救] western blot抗體問題
時間Thu May 15 09:51:11 2014
請問各位，這幾次壓片都沒有結果。
抗體是用Santa cruz的,都存放於4度C冰箱
都用PBST配1:1000，壓O/N
可是抗體是學姊留下來的，學姊大概一年前畢業吧
二抗也是用PBST配的，1:5000
每次去壓的結果都頗醜．
p27和p21根本沒出現過...只有出現actin
而且actin也不在43這個位置上....
想詢問一下各位怎麼解決...換抗體嗎還是要用脫脂牛奶去配抗體?
實驗室沒半個學長姐超級囧欸...
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1F：→ ai760721:一般不是都會用blocking去稀釋嗎? 05/15 11:55
2F：→ xxtomnyxx:blocking 用什麼，抗體就用什麼去稀釋 05/15 13:26
3F：推 jsi:看起來抗體配製沒甚麼問題。actin的圖和曝光時間可提供一下嗎? 05/15 17:56
4F：→ jsi:說不定是protein量太少所導致。 05/15 17:57
5F：→ jsi:直接問畢業學姐會比較快，若她壓的訊號都很好，比對你們之間 05/15 18:02
6F：→ jsi:作法差異就知道啦! 05/15 18:03
7F：→ iceking:連自己try條件都沒try過就上來問,也沒附圖,我們也很囧欸~ 05/16 00:21
8F：→ ko363630:ECL效果不是頂多才半小時? o/n沒差吧 05/16 01:50
10F：→ bear2926:這個是第一次有壓出來的actin 05/16 13:32
12F：→ bear2926:這個是後來壓的，可是不在43那條位置上... 05/16 13:34
13F：→ bear2926:可是p21和p27都壓不出來欸.... 05/16 13:35
14F：→ bear2926:如果一抗用牛奶稀釋...這樣不是不好保存? 05/16 13:36
15F：→ blence:看背景感覺訊號像是調過，如果是這樣p27跟p21看不到也合理 05/16 14:26
16F：→ blence:而且你要看p21,p27,應該知道這兩個不見得在所有細胞都明顯 05/16 14:27
17F：推 iceking:用牛奶稀釋放1~2個禮拜沒問題，1抗不要用PBST,用PBS milk 05/16 16:06
18F：→ iceking:稀釋看看 05/16 16:06
19F：→ bear2926:好，我今天試看看...因為我怕用牛奶稀釋不能一直reuse 05/19 11:10