作者Virtualkay (何鎧)
站內Biotech
標題[討論] 有人使用過Takara LA polymerase嗎?
時間Tue May 6 11:25:21 2014
小弟最近操作clone時，使用號稱highly-fidelity的Takara LA pol.
但挑8個clone送定序後發現，許多都有point mutation，而且突變的點
都不一樣，大多突變成G/C。 不曉得有沒有人遇過類似的問題？
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1F：→ blence:先前用這支發現如果是cDNA約1~2k大的,不太會有mutation 05/06 12:41
2F：→ blence:反倒是拿plasmid量有10ng以上去PCR,連500bp也一直突變 05/06 12:43
3F：→ Ianthegood:clone的話是你的菌有問題吧 pol出問題的機率小 05/06 13:02
4F：→ xxtomnyxx:High Fidelity Polymerase 唯一推薦 Phusion！ 05/06 14:22
5F：→ xxtomnyxx:自己和實驗室夥伴用過後都說讚wwwwww 05/06 14:23
6F：→ xxtomnyxx:好奇問一下你的 PCR template 來源是什麼？產物多大？ 05/06 14:24
7F：推 cort41:這隻酵素 8年當碩士生時就在用了~~~~~~~~~~超爛 換KAPA吧 05/06 16:51
8F：推 jabari:給你一個combo.. 用Roche probemaster 再用 Roche HF 威 05/06 17:15
9F：推 bluesnow1122:Phusion蠻貴的但是很好用~XD 05/06 19:25
10F：推 chaunen:用KAPA的hifi P個2.3k都OK 試過1.3k 25+25cycle 也OK 05/07 13:51
11F：→ chaunen:微晶代理的樣子 可以 A sample 05/07 13:52
12F：→ Virtualkay:blen或許我們的狀況是類似的, 但我只做過這個cDNA 05/10 23:17
13F：→ Virtualkay:產物約300bp, template來源是plasmid(100ng->50X dilu) 05/10 23:18
14F：→ Virtualkay:所以大家共同的結論, 讓我決定不再買Takara了.. 05/10 23:19
15F：推 jeol1620:推 pfu ULTRA II 怕太貴可以減量然後補 taq 05/13 22:47
16F：→ jeol1620:我們做突變或選殖 p 10K全質體都沒問題 05/13 22:49