※ 引述《NCKUM (成功大學醫學)》之銘言： : 借這標題問個問題 : 最近有聽到所上一位老師說 : 今天ligand如果已結合receptor 應該antibody會認不到 flow cytometry有可能會因為結構改變而認不到 western blot主要是辨認linear epitope應該不至於構型改變就認不到 : 因為會構型改變（造成表現降低）或是下面被切斷 可能造成比原本WB的位子還要低 像是egfr 我們曾經發現phospho-egfr增加 但total egfr降低 : 最近我也是碰到一些難題 : 我認知上cell line receptor本來就固定量 沒有喔 receptor的表現量是動態的 會受到很多因素而上升或下降 : 最近我做ELISA發現chemokine ligand有相對control增加10倍以上 : 但在WB看receptor反而減少 : 例CCR2 datasheet predict 42 KDa monorabbit : 但在這位子我看到減少 反而看到35KDa增加 : 但我有拿positive control 是42KDa : 請問35位子是否可能是cleavaged form(問過specialist他們不清楚） : 學姐給我一個很妙答案 monoclone可以看到很多band應該被cleavaged 所以看35位子 : 我有用過confocal 去看 有增加 但WB 大家比較信 cleavaged form alternative splicing都有可能 應該還要多做實驗才能判斷 : 感謝 : ※ 引述《realism ()》之銘言： : : 我想確認某個細胞上是否真的有特定的receptor 不知道有哪些方式? : : 目前自己想到的是 : : 1. QPCR去抓 (但是否會比較不準 因為不是直接去認cell表面?) : : 2. flow cytometry 去抓surface marker (不過我沒做過 是不是 : : 要去找有沒有我要的protein的commercial的抗體? ) : : 初學者的疑問 謝謝大家幫忙 >.< -- --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 106.1.230.26 ※ 文章網址: http://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1397853725.A.CDA.html