作者tabosin (tabo)
看板Biotech
標題[求救] G418 stable clone
時間Fri Mar 14 19:49:26 2014
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
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目前實驗正在挑stable clone 藥篩是用G418 800microgram/microliter
可是細胞在第5天才開始死亡 死亡的很慢 而且細胞數很多 幾乎到第三層了
因為當初transfection 怕轉不進去 轉了兩次 細胞就變那麼多了QAQQQQQ
現在幾乎還是全滿的狀態 只是細胞有飄比較多起來
當初做藥量測試 細胞沒那麼多 現在細胞數增多 加上他死得那麼慢
細胞會不會產生對G418的抗藥性?
現在要篩1個禮拜 還可以增加G418的濃度嗎?
請高手大大們指點~ 目前卡卡中QAQQQ
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.23.37.126
1F：推 qiet:你得把細胞弄下來分盤稀釋讓細胞慢慢分裂生長個幾個禮拜 03/14 20:16
2F：→ tabosin:藥篩一個禮拜了 可以分盤嗎? 03/14 20:18
3F：→ chaunen:一直subculture吧 等transient效果退了 真正integrate 03/14 22:48
4F：→ chaunen:進到genome的極少部分細胞才會慢慢變多 03/14 22:49
5F：推 qiet:分盤稀釋倍數高一點，之後每兩到三天換medium讓細胞分裂生長 03/14 23:16
6F：推 qiet:有integrate進genome的細胞才能存活下來，細胞太滿根本無法 03/14 23:18
7F：→ qiet:生長，當然也不會被G418殺死阿～ 03/14 23:19
8F：推 elelith:你用的濃度到底是多少阿? 800ug/ml? 03/15 05:30
9F：→ ai760721:800ug/ul 有點驚人... 03/16 09:52
10F：推 tiffan1118:造他細胞的死亡速度 應該是ug/ml 他應該打錯 03/16 11:41
11F：→ beingho:一點都不驚訝....我用25 mg/mL G418 竟然殺不死SW620 見鬼 05/23 11:43